[发明专利]一种提取DNA的方法和解离染色质的方法以及高氯酸盐的用途

说明书

本发明提供了一种解离染色质的方法，该方法包括：将含有染色质的样品与解离剂混合；其中，所述解离剂含有高氯酸锂。本发明还提供了一种提取DNA的方法，其中，该方法包括如下步骤：(1)将含有染色质的样品与解离剂混合均匀，得到解离后的物料；(2)将所述解离后的物料与蛋白抽提液混合均匀，分离得到蛋白抽提后的上清液；(3)将所述蛋白抽提后的上清液与DNA沉淀剂混合，得到DNA沉淀；其中，所述解离剂含有高氯酸锂。本发明还提供了一种高氯酸盐在提取DNA中的用途，其中，所述高氯酸盐为高氯酸锂。本发明的方法具有重复性好，稳定性高的优点，同时避免了蛋白酶K法需要较高温度加热及长时间消化的劣势。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种解离染色质的方法、一种提取DNA的方法和高氯酸盐的用途。

背景技术

染色质是遗传物质的载体。染色质是指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构，是间期细胞遗传物质存在的形式。核小体是组成染色质的基本组成单位，由基因组DNA和5种组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4共同组成。2分子的H2A、H2B、H3和H4共同构成八聚体的核心组蛋白，DNA双螺旋缠绕在这一核心上形成核小体的核心颗粒。核心颗粒间由DNA和组蛋白H1构成的连接区而连接成串珠样结构。在哺乳动物基因组DNA的提取环节中，无论是经典提取方法(酚抽提法、异丙醇沉淀法和甲酰胺裂解法)还是后期改良的方法，通常都是利用表面活性剂，如十二烷基硫酸钠(SDS)来裂解细胞，利用蛋白酶K来降解核小体中的组蛋白，从而实现基因组DNA的分离。然而，由于利用蛋白酶K对组蛋白进行酶解消化，经典方法不仅需要加热设备(如水浴锅)，而且增加了操作步骤，环节繁琐，实验用时长。

盐酸胍、硫氰酸胍、碘化钠和高氯酸钠作为离液剂可以用于DNA的提取。如CN1187196A公开了一种用于提取DNA的方法和装置，涉及了盐酸胍、硫氰酸胍、碘化钠和高氯酸钠的使用，但是，上述离液剂在用于提取基因组DNA时，存在得率低的缺陷。

发明内容

本发明的目的是克服现有用于DNA的提取方法的得率低的缺陷，提供一种具有得率高等优势的DNA提取方法。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种解离染色质的方法，该方法包括：将含有染色质的样品与解离剂混合；其中，所述解离剂含有高氯酸锂。

另一方面，本发明还提供了一种提取DNA的方法，所述DNA在提取前存在于染色质中；其中，该方法包括如下步骤：(1)将含有染色质的样品与解离剂混合均匀，得到解离后的物料；(2)将所述解离后的物料与蛋白抽提液混合均匀，分离得到蛋白抽提后的上清液；(3)将所述蛋白抽提后的上清液与DNA沉淀剂混合，得到DNA沉淀；其中，所述解离剂含有高氯酸锂。

再一方面，本发明还提供了一种高氯酸盐在提取DNA中的用途，所述DNA在提取前存在于染色质中，其中，所述高氯酸盐为高氯酸锂。

通过上述技术方案，本发明以化学物质高氯酸锂(LiClO₄)替代蛋白酶K来解离组蛋白和基因组DNA，这种方法具有操作简单、重复性好，稳定性高的优点，同时避免了蛋白酶K法需要较高温度(如50-65℃)加热及长时间消化的劣势。与传统蛋白酶K消化法相比，本发明能高效、快速、简便地提取人类基因组DNA，且基因组完整性更好，可用于PCR、芯片分析、分子克隆等分子生物学相关实验。并且，与使用高氯酸钠进行DNA提取的技术方案相比，本发明具有得率高的优势。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是高氯酸锂法(LiClO₄法)和蛋白酶K法两种基因组DNA提取方法提取脐带组织和脐带间充质干细胞基因组DNA的电泳检测结果。