[发明专利]用于真核细胞系的提高蛋白表达水平的MAR转录调控元件及其表达系统

权利要求书

1.一种用于真核细胞系的提高蛋白表达水平的MAR转录调控元件，其特征在于，所述MAR转录调控元件为具有增强转录的功能的DNA顺式作用元件，MAR转录调控元件为MAR1，MAR2，MAR3.MAR4，MAR5中的任意一种，MAR1的核苷酸序列为SEQIDNO.1,MAR2的核苷酸序列为SEQIDNO.2,MAR3的核苷酸序列为SEQIDNO.3,MAR4的核苷酸序列为SEQIDNO.4和MAR5的核苷酸序列为SEQIDNO.5。

2.根据权利要求1所述的用于真核细胞系的提高蛋白表达水平的MAR转录调控元件，其特征在于，所述MAR转录调控元件提取于中国仓鼠卵巢细胞系CHO。

3.含有如权利要求1所述MAR转录调控元件的医用重组抗体的哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，包括：1)使得基因高效表达的DNA顺式作用元件MAR，2)睡美人转座子载体表达抗体基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；3)筛选标记基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；4)IRES序列SEQIDNO.8。

4.根据权利要求2所述的医用重组抗体的哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述睡美人转座子载体，含有可被转座酶识别的反向重复序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示。

5.根据权利要求2所述的医用重组抗体的哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述筛选基因为二氢叶酸还原酶基因DHFR，所述IRES元件为基因合成的FMDVIRES序列。

6.根据权利要求3-5任一项所述的医用重组抗体的哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述MAR转录调控元件为MAR2。

7.一种高效稳定表达重组抗体的稳定细胞株的筛选方法，其特征在于，利用权利要求3-5任一项所述的哺乳动物细胞表达载体，将目标基因转染到哺乳动物宿主细胞，筛选获得高表达目标基因的稳定细胞株。

8.根据权利要求7所述的的高效稳定表达重组抗体的稳定细胞株的筛选方法，其特征在于，所述哺乳动物宿主细胞是中华仓鼠卵巢细胞CHO和人胚肾上皮细胞HEK293。

9.根据权利要求7所述的的高效稳定表达重组抗体的稳定细胞株的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括针对筛选标记的抗生素筛选和针对扩增标记基因的药物加压筛选。

10.利用权利要求7-9任一项所述的高效稳定表达重组抗体的稳定细胞株的筛选方法获得的高效稳定表达的细胞株。