[发明专利]ASS1甲基化检测在骨性关节炎诊断中的应用

说明书

本发明涉及ASS1甲基化检测在骨性关节炎诊断中的应用，更具体的涉及ASS1基因、ASS1基因的甲基化检测及其在诊治骨性关节炎中的应用。发明基于测序结果分析筛查在骨性关节炎患者中基因低表达同时基因呈高甲基化的候选基因ASS1，进一步的实验验证基因ASS1在骨性关节炎患者膝关节软骨组织中低表达，同时该基因在患者膝关节软骨组织中甲基化程度明显高于正常组，ASS1蛋白表达和基因甲基化呈负显著相关性。本发明提供了一种新的骨性关节炎诊治靶点，具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及ASS1甲基化检测在骨性关节炎诊断中的应用，更具体的涉及ASS1基因、ASS1基因的甲基化检测及其在诊治骨性关节炎中的应用。

背景技术

甲基化是蛋白质和核酸的一种重要的修饰，调节基因的表达和关闭，与癌症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关，是表观遗传学的重要研究内容之一。最常见的甲基化修饰有DNA甲基化和组蛋白甲基化。DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。研究证实，CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化导致了人体1/3以上由于碱基转换而引起的遗传病。DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基腺嘌呤(N6-mA)及7-甲基鸟嘌呤(7-mG)。在真核生物中，5-甲基胞嘧啶主要出现在CpG序列、CpXpG、CCA/TGG和GATC中。在哺乳动物的生殖细胞发育时期和植入前胚胎期，其基因组范围内的甲基化模式通过大规模的去甲基化和接下来的再甲基化过程发生重编程，从而产生具有发育潜能的细胞；在细胞分化的过程中，基因的甲基化状态将遗传给后代细胞。骨性关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨退行性病变和关节周围骨质增生为主要病理特征的慢性进行性骨关节病。有报道显示，部分基因的DNA甲基化有可能引起骨性关节炎。

本发明通过对5例骨性关节炎病人及2例对照的膝关节软骨组织进行高通量甲基化测序分析及转录组测序分析，筛选出几个在病例组中呈高甲基化且基因表达下调的候选基因及其甲基化位点。进一步的分子生物实验验证了测序的结果。本发明提供了一种新的骨性关节炎诊治靶点，具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种骨性关节炎诊疗试剂，诊疗试剂组分中包含检测或降低序列表中SEQ ID NO.3的CpG岛甲基化程度。

进一步，所述诊疗试剂组分中的包含检测或降低序列表中SEQ ID NO.3的第166bp处CpG岛甲基化程度。

本发明的目的在于提供一种骨性关节炎诊断试剂，所述诊断试剂组分包含检测序列表中SEQ ID NO.3的CpG岛甲基化程度的组分。

进一步，所述诊疗试剂组分中包含检测序列表中SEQ ID NO.3的第166bp处CpG岛甲基化程度的组分。

进一步，采用下列方法中任意一种或几种的组合对甲基化程度进行检测：甲基化敏感的限制性内切酶方法、NaHSO₃法、芯片技术方法；所述NaHSO₃法包括BSP测序法、联合NaHSO₃限制性分析法、甲基化特异性PCR、荧光定量法；所述芯片技术方法包括甲基化高密度芯片、差异甲基化杂交、甲基化特异性寡核苷酸芯片。