[发明专利]骨性关节炎诊疗试剂及其应用

说明书

本发明涉及骨性关节炎诊疗试剂及其应用，具体的涉及SLC38A1甲基化检测试剂及其在骨性关节炎诊断中的应用。发明人发现SLC38A1在骨性关节炎患者膝关节软骨组织中低表达，并且该基因甲基化程度较高，蛋白检测结果表明SLC38A1蛋白表达和基因甲基化呈负显著相关性，表明SLC38A1基因检测可用于诊治骨性关节炎，进一步还可以检测SLC38A1基因的甲基化。本发明为临床骨性关节炎检测提供了新的靶点。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及骨性关节炎诊疗试剂及其应用，更具体的涉及SLC38A1甲基化检测试剂及其在骨性关节炎诊断中的应用。

背景技术

骨性关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性疾病，又名退行性关节病，增生性骨关节炎。本病的发生率随年龄的增高而增多，是一个常见的老年人的关节病。目前骨性关节炎的病因尚未阐明，它的发生发展是一个长期、慢性和逐步渐进的过程，涉及全身和局部的许多因素，可能是综合因素所致。目前临床上缺乏有效的防治手段，严重影响患者的生活质量。目前骨性关节炎的病因尚未阐明。

在基因组中，除了DNA和RNA序列以外，还有许多调控基因的信息，它们虽然本身不改变基因的序列，但是可以通过对基因DNA和组蛋白的化学修饰、RNA干扰、蛋白质与蛋白质、DNA和其他分子的相互作用，而影响和调节基因的功能和特性，并且能够通过细胞分裂和增殖周期遗传给后代，这就是表观遗传学。表观遗传学机制主要涉及DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、非编码RNA调控等。DNA的甲基化是发现最早的、最基本的，也是研究最多的。启动子的DNA甲基化对基因的表达有抑制作用,而基因本体的DNA甲基化与基因的表达关系因物种或细胞类型不同而异。增强子的DNA甲基化状态与基因活性呈反比关系，沉默子则相反呈正相关。后基因组时代不仅揭示基于疾病与基因的关系，进一步阐述影响基因表达的原因。

发明通过对6例骨性关节炎病人及3例对照的膝关节软骨组织进行高通量甲基化测序分析及转录组测序分析，筛选出在病例组中呈高甲基化且基因表达下调的候选基因SLC38A1及其甲基化位点。进一步的分子生物实验验证了高通量测序结果。本发明提供了一种新的骨性关节炎诊治靶点，具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种骨性关节炎诊疗试剂，所述诊疗试剂组分中的一种或几种用于检测或降低序列表中SEQ ID NO.3的CpG岛甲基化程度。

进一步，所述诊疗试剂组分中的一种或几种用于检测或降低序列表中SEQ IDNO.3的第116bp处和/或150bp处CpG岛甲基化程度。

优选的，采用BSP测序法对SEQ ID NO.3的甲基化程度进行检测，更优选的，采用引物序列为序列表SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5进行BSP测序检测。

优选的，采用甲基化特异性PCR法对甲基化程度进行检测，甲基化特异性PCR法包括一对甲基化检测引物和一对非甲基化检测引物。优选的，甲基化特异性PCR法对序列表中SEQ ID NO.3的第116bp处和/或150bp处CpG岛甲基化程度进行检测。

优选的，采用引物序列为序列表SEQ ID NO.6到SEQ ID NO.9进行甲基化特异性PCR法对甲基化程度进行检测。

进一步，采用下列方法中任意一种或几种的组合对甲基化程度进行检测：甲基化敏感的限制性内切酶方法、NaHSO₃法、芯片技术方法；所述NaHSO₃法包括BSP测序法、联合NaHSO₃限制性分析法、甲基化特异性PCR、荧光定量法；所述芯片技术方法包括甲基化高密度芯片、差异甲基化杂交、甲基化特异性寡核苷酸芯片。