[发明专利]蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：MS、1.2-1.7mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.3mg/L的萘乙酸、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝2号培养基、0.5-2.0mg/L的甲硫达嗪、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、1.0-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮植株；其中，所述第三培养基包括：MS、0.4-0.6mg/L的萘乙酸、1.8-2.2mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤四、将步骤三得到的健壮植株置于第四培养基中培养，得完整带根苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、0.5-1.0mg/L的萘乙酸、8-12g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂。

2.如权利要求1所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基之前，对外植体进行消毒处理，所述消毒处理的具体步骤包括：

步骤a、将外植体置入体积分数为1.5-3％的洗洁精水溶液中浸泡3-7min，取出后用线状自来水冲洗15-30min；

步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡8-10min，取出后用无菌水冲洗3-5次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。

3.如权利要求1所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，在所述步骤四之后，还包括：

步骤五、将步骤四得到的完整带根苗连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4-7天，待完整带根苗的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至椰糠基质中。

4.如权利要求1所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，

在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天。

5.如权利要求4所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。

6.如权利要求4所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.5-6.0。

7.如权利要求2所述的蜘蛛抱蛋组织培养快繁方法，其特征在于，在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：

将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.05％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-5℃条件下保持10min，随后在5MPa、20℃条件下保持15min，最后在1MPa、30℃条件下保持10min。