[发明专利]多聚谷氨酰化DNAJC7的新应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术和医学诊断领域，特别是涉及一种多聚谷氨酰化DNAJC7的新应用，即多聚谷氨酰化DNAJC7在制备肾细胞癌诊断试剂或诊断设备中的应用。

背景技术

肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)的发病率居泌尿系统肿瘤第二位(仅次于膀胱癌)，目前RCC的诊断主要依靠影像学检测以及肾脏组织活检。

但是，一方面目前临床上一些偶发肾癌、小肾癌等病例的影像学特征并不典型，易出现漏诊或良恶性肿瘤鉴别有误的现象；另一方面肾脏穿刺活检诊断RCC的创伤性大，需要严格排除禁忌症。并且，常规方法诊断RCC的成本较高，且组织活检技术操作复杂，易产生副作用。

DNAJC7(DnaJhomolog,subfamilyC,member7)属于热休克蛋白家族成员，由两个N-末端重复结构域和C-末端的DnaJ结构域组成，作为分子伴侣以ATP依赖的方式连接热休克蛋白70和热休克蛋白90,并调节其功能。有研究认为热休克蛋白是癌症发生发展过程中的关键因素，可能作为抗癌药物的靶位点。热休克蛋白也可以参与p53负反馈调节通路，从而增强p53蛋白的稳定性和转录活性，参与肿瘤抑制。但迄今为止，仍然没有关于热休克蛋白及肾细胞癌之间相关性的报道。

发明内容

基于此，本发明提供一种多聚谷氨酰化DNAJC7的新应用，通过检测生物样本中的多聚谷氨酰化DNAJC7含量，可以提示肾细胞癌的存在可能性。

实现上述目的的技术方案如下：

血清中多聚谷氨酰化DNAJC7作为诊断肾细胞癌分子标志物的应用。

本发明还公开了一种多聚谷氨酰化DNAJC7的检测试剂盒，包括有检测血清中多聚谷氨酰化DNAJC7的试剂。

在其中一个实施例中，该检测试剂盒包括：

固定相体系：包括包被于固定相的DNAJC7抗体；

标志物体系：包括直接或间接连接标记示踪物的GT335。

所述GT335为anti-PolyglutamylationModificationmAb，是一种特异的多聚谷氨酸检测抗体，能够与所有的多聚谷氨酰化形式蛋白质结合。

在其中一个实施例中，所述标志物体系中，所述间接连接标记示踪物的GT335由生物素标记的GT335，和链霉亲和素标记的标记示踪物组成。

在其中一个实施例中，所述固定相体系为包被DNAJC7抗体的微孔板，所述标记示踪物为辣根过氧化物酶。可以理解的，也可通过磁性微球等可在特定环境下固定，不被清洗掉的固定相来作为DNAJC7抗体的载体，也可采用其它标记示踪物在化学发光免疫分析方法中反应待测物的含量水平。

本发明还公开了血清中多聚谷氨酰化DNAJC7作为标志物在开发和/或制备具有诊断肾细胞癌用途的产品中的应用。

本发明还公开了检测血清中多聚谷氨酰化DNAJC7的物质在制备肾细胞癌诊断试剂或诊断设备中的应用。

本法明还公开了一种多聚谷氨酰化DNAJC7的检测方法，包括以下步骤

将DNAJC7抗体作为底物包被微孔板，加入待测血清样本、直接或间接连接标记示踪物的GT335，显色后检测各个孔的发光强度，根据发光强度计算得到多聚谷氨酰化DNAJC7的含量。

本发明还公开了一种上述的多聚谷氨酰化DNAJC7的检测方法在制备肾细胞癌诊断试剂或诊断设备中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过对大量肾细胞癌患者手术切除后的肾癌组织和癌旁组织，以及肾细胞癌患者和健康对照组的血清样本的DNAJC7mRNA水平进行了qRT-PCR检测，结果显示没有太大的差异。但是，在免疫沉淀分析中的结果显示肾细胞癌患者血清中多聚谷氨酰化DNAJC7(polyglutamylated-DNAJC7)的含量明显高于健康对照组。本发明人进一步使用生物素标记的GT335检测多聚谷氨酰化DNAJC7的水平后发现，肾癌细胞患者血清中有较强的信号，显著高于对照组(P<0.01)。证明肾癌细胞患者血清中存在polyglutamylated-DNAJC7，而健康人或者肾炎患者血清中几乎不存在，因此，多聚谷氨酰化DNAJC7可以单独作为肾细胞癌的分子标志物，通过检测血清样本中的多聚谷氨酰化DNAJC7含量，能够准确地将肾细胞癌患者与健康人群、慢性肾炎及肾结石患者鉴别开来。