[发明专利]一种剑叶龙血树疏松愈伤组织诱导的方法

权利要求书

1.一种剑叶龙血树的疏松愈伤组织诱导的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)外植体的消毒：先用洗洁精水溶液清洗外植体表面污垢，置于烧杯中进行流水冲洗5～8min，然后移至超净工作台上，用75v/v％酒精将种子和芽浸泡30s，无菌水冲洗1遍，再用0.1v/v％HgC12浸泡，时间分别为8、12、15min，无菌水浸泡3次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后进行接种，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；所述外植体为饱满种子或种子播种于河沙里萌发的芽；

(2)无菌苗的获得：将步骤(1)得到的外植体接种于MS诱导培养基中，在培养温度为25±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下培养8～15d便开始出芽，随后长出无菌苗，所述MS诱导培养基中添加0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)培养基对愈伤组织的诱导效果：将步骤(2)中得到的无菌苗接种于MS、B5、N6三种基本培养基中，在培养温度为25±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下培养25～30d，逐渐产生疏松愈伤组织，所述MS、B5、N6三种基本培养基中分别添加0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(4)培养基对愈伤组织的继代效果：将步骤(3)中得到的愈伤组织置于MS继代培养基中，在培养温度25±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为10h/d的条件下培养10d，切口端逐渐膨大，形成较多疏松的愈伤组织，所述MS继代培养基中添加0.1～2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5～3.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。