[发明专利]卵巢癌癌组织3D培养方法及其在药效评价中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物学领域，特别是涉及一种卵巢癌癌组织3D培养方法及其在药效评价中的应用。

背景技术

肿瘤是严重危害人民身体健康的主要疾病之一，肿瘤的发生机理多样而复杂，但目前常规的化疗药物几乎都是针对增殖能力旺盛细胞的细胞毒药物，对人体内正常的高增殖细胞也产生毒副作用。因此，许多药物研发机构均致力于开发高效、低毒和高特异性的靶向性抗肿瘤药物，传统单一的抗肿瘤药物筛选方法也已不足以应付抗肿瘤药物药效学发展的需求。

伴随着对肿瘤发病机理认识的不断深入和肿瘤靶向性药物的开发，精确化医疗逐渐成为未来肿瘤医学研究与应用的趋势，而精确化治疗的关键在于肿瘤基因和生物分子标志物的诊断、微环境对肿瘤进展和疗效的影响以及基于前者条件下的抗癌药物种类和剂量的个体化选择。

目前抗肿瘤药物筛选评价的体外方法主要是肿瘤细胞的2D培养系统，体内筛选评价方法主要使用的是动物模型。

2D培养时，肿瘤细胞在形态、分化、扩增、对刺激的代谢反应以及基因蛋白质表达等方面均与其在体内的状态存在着很大的不同，许多在肿瘤组织中存在的基因突变，在肿瘤细胞系中并不存在。2D培养也缺乏肿瘤细胞生存的微环境，而肿瘤细胞生长的微环境对其生物性状和信号传导途径均有巨大的影响，即使是原代肿瘤细胞的2D培养也不能真实再现这种相互影响，无法提供与活体肿瘤组织更接近的类器官和新鲜肿瘤组织3D培养所能提供的强大信息。此外，微环境中的基质成分、血管系统、各类生长因子、免疫刺激因子和免疫细胞等对细胞的生物性状和抗肿瘤药物的敏感性和耐受性也有很大的影响。而目前使用的动物评价体系，由于与人类存在着较大的种属差异，也不能完全反映药物在人体内的代谢过程、药效作用和毒副作用。因此，许多在临床前评价中具有潜力的药物，在临床试验时却失败了，证明了目前使用的体内外评价体系并不能很好地预测药物在人体内的有效性和安全隐患。建立能更好地模拟人肿瘤组织的3D培养方法是抗肿瘤药物发展的迫切需求。

不同肿瘤患者对不同化疗药物的敏感性存在着差异，即使是同一种抗肿瘤药物，在不同的肿瘤患者个体身上也表现出不同的治疗效果和预后。出现这种情况的主要原因与复杂的肿瘤异质性及肿瘤细胞和微环境的相互作用有关，因此，提供有针对性的精确化诊疗已成为肿瘤治疗的发展方向。但目前辅助精确化诊疗实施的主要方法是基因测序和生物分子的标记；临床上虽已开展了个体化的药物评价实验，但使用的方法主要是从患者肿瘤组织分离的肿瘤细胞的2D培养和人肿瘤组织在裸鼠体内的评价体系（PDX），不仅存在着上述问题，而且耗时、费力，影响对患者采取及时有针对性的治疗措施。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种卵巢癌癌组织3D培养方法及其在药效评价中的应用，有望解决目前常规的抗肿瘤药物的评价方法中存在着种属差异对评价结果的影响、不能准确反应药效、评价时间太长等问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种卵巢癌癌组织3D培养方法，包括步骤为：（1）向孔板中滴加Matrigel胶，室温或CO₂培养箱内静置使所述Matrigel胶凝固；

（2）将浸于第一培养液中的肿瘤组织块移至凝固后的所述Matrigel胶上，再向所述肿瘤组织块上滴加Matrigel胶，室温或CO₂培养箱内静置使所述Matrigel胶凝固；

（3）向步骤（1）的孔板中加入第二培养液进行培养，再取出培养后的所述肿瘤组织块并固定，其中所述第二培养液包括的组分有高糖DMEM培养液、F12培养液、表皮细胞生长因子EGF、成纤维细胞生长因子FGF和10×N₂。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）和步骤（2）中所述Matrigel胶是用DMEM稀释的，所述DMEM与所述Matrigel胶的体积比为1:1-1:5。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）和步骤（2）中所述每次滴加稀释后的Matrigel胶的量为10-50μL。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述肿瘤组织块的大小为0.5-1mm³，所述肿瘤组织块先用缓冲液洗涤后再浸于DMEM培养液中，所述肿瘤组织块的制作过程在碎冰上进行。