[发明专利]一种小规模木霉菌固态发酵方法

权利要求书

1.一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于它按以下步骤进行：

一、制备PDA斜面培养基并接种木霉菌，室温培养4～6天，然后用灭菌水洗下PDA斜面培养基上的木霉分生孢子，制备成浓度为10⁸～10¹⁰个孢子/mL的菌液；

二、按重量百分比称取80％的稻壳、18％的麦麸、1％的玉米面和1％的黄豆粉，加入自来水至湿度为180％，搅匀后装入聚丙烯灭菌袋，然后于121℃灭菌2.5h，获得灭菌后的发酵料；

三、无菌托盘中装入150～160g灭菌后的发酵料，加入1mL步骤一中的菌液并拌匀，然后用保鲜膜封口，室温，自然光下培养至木霉菌菌丝体布满发酵料，然后用镊子在保鲜膜表面扎孔，托盘的4个角，每个角扎两个孔，待发酵料上布满木霉分生孢子后，将孔扩大2倍，继续发酵至孢子全部散出，即完成小规模木霉菌固态发酵。

2.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤一中PDA斜面培养基的配制：200g马铃薯、20g葡萄糖、15g琼脂和1000mL水，装入聚丙烯大试管中，每管20mL，115℃灭菌30min后摆斜面。

3.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤一中木霉菌为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536、加纳木霉(Trichoderma ghanense)ACCC30153、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC30588、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC30371、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC31959、绿木霉(Trichoderma virens)ACCC32490或棘孢木霉(Trichoderma asperellum)CFCC88162。

4.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤一中聚丙烯大试管的规格：3cm口径×24cm长。

5.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤一中制备PDA斜面培养基并接种木霉菌，室温培养5天。

6.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤一中制备成浓度为10⁹个孢子/mL的菌液。

7.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤二中聚丙烯灭菌袋的规格：15cm×40cm。

8.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤三中无菌托盘中装入155g灭菌后的发酵料。

9.根据权利要求1所述的一种小规模木霉菌固态发酵方法，其特征在于步骤三中托盘的规格：口部外径：长×宽×高＝42cm×29.5cm×6.5cm，底部内径：长*宽＝36cm×23.5cm；托盘的材质：厚度为1.5mm的透明亚克力。