[发明专利]一种用于HLA基因分型的试剂盒和方法有效
| 申请号： | 201510757211.4 | 申请日： | 2015-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN105255875B | 公开（公告）日： | 2018-08-28 |
| 发明（设计）人： | 贝锦新;冯丽娜;左晓宇;刘稳升 | 申请（专利权）人： | 中山大学肿瘤防治中心 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘孟斌 |
| 地址： | 510000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 扩增 引物 分型 扩增引物 引物序列 分辨率 准确率 科研 应用 | ||
1.一种用于HLA基因分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于扩增HLA-B基因的2号外显子和3号外显子的引物，和用于扩增HLA-B基因的4号外显子的引物；
所述用于扩增HLA-B基因的2号外显子和3号外显子的引物包括由SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示的引物序列组成的扩增引物对；
所述用于扩增HLA-B基因的4号外显子的引物包括由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物序列组成的扩增引物对。
2.一种HLA基因分型的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)提取待测样本的DNA；
(2)分别采用由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物序列组成的扩增引物对和由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物序列组成的扩增引物对，对待测样本DNA进行PCR扩增，得到含有HLA-B基因的2号外显子和3号外显子的第一扩增片段和含有HLA-B基因的4号外显子的第二扩增片段，然后分别纯化含有HLA-B基因的2号外显子和3号外显子的第一扩增片段和含有HLA-B基因的4号外显子的第二扩增片段；
(3)将步骤(2)纯化后的第一扩增片段和第二扩增片段分别进行测序；
(4)将步骤(3)中的测序结果与数据库中HLA基因的外显子标准序列进行对比，确定HLA基因的型别。
3.根据权利要求2所述的HLA基因分型的方法，其特征在于，所述步骤(4)中数据库为国际组织IMGT数据库。
4.根据权利要求2所述的HLA基因分型的方法，其特征在于，如果比对后出现模棱两可的分型结果，则将步骤(2)中的第一扩增片段和第二扩增片段分别进行T-A克隆，然后进行测序比对，确定HLA基因的型别。
5.根据权利要求2所述的HLA基因分型的方法，其特征在于，如果比对后出现模棱两可的分型结果，则针对步骤(2)中的第一扩增片段和第二扩增片段分别设计allele特异性的引物进行区分，然后进行扩增后测序比对，确定HLA基因的型别。
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