[发明专利]一种副溶血弧菌检测方法

权利要求书

1.一种副溶血弧菌检测方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

1)生物素-抗体复合物的制备

用N,N-二甲基甲酰胺将生物素-N-羟基琥珀酰亚胺酯配制成溶液，将生物素-N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液加入到副溶血弧菌鞭毛蛋白抗体溶液中，冰浴反应制成生物素-抗体复合物；过量未反应和水解的生物素用微量透析管4℃搅拌透析去除；

2)量子点-抗体的制备

将量子点标记的链霉亲和素-525与步骤1)制备的生物素-抗体在PBS溶液中混合，轻柔震荡15min制成量子点-抗体；再加入过量的生物素封闭量子点-抗体，再用微量透析管4℃搅拌透析去除生物素得到纯化的量子点-抗体；

3)制备待检测样品的菌悬液

取待测样品接入液体培养基中振荡培养得到菌悬液；所述的液体培养基的配方如下：胰蛋白胨10g、鱼蛋白胨10g、酵母粉1g、FePO₄ 0.1g、NaCl 30g、酪蛋白水解物5g、牛肉浸粉10g、CaCl₂ 2.0mg、MgCl₂ 4mg、蒸馏水1L；

4)菌悬液的荧光检测

在激发波长为350nm，发射波长为450nm～600nm的条件下扫描测量量子点-抗体的荧光值，然后加入氧化石墨烯GO溶液，再加入菌悬液得到反应体系；相同条件下测量荧光值，如果荧光强度未发生显著变化，说明待测样品中未检出副溶血弧菌，如果荧光强度部分恢复，表明待测样品中检出副溶血弧菌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)的振荡培养是28℃、180rpm进行培养。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤4)的反应体系中量子点-抗体的浓度为1nM。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤4)的反应体系中氧化石墨烯GO溶液的浓度为60ng/ml。