[发明专利]一种中温碱性脂酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种中温碱性脂酶基因，其特征在于：中温碱性脂酶est424为SEQIDNo.1中碱基所示序列。

2.按权利要求1所述的中温碱性脂酶基因，其特征在于：所述中温碱性脂酶基因编码的蛋白为SEQIDNo.2中氨基酸所示序列。

3.一种权利要求1所述的中温碱性脂酶基因的构建方法，其特征在于：

1)克隆酯酶基因est424；

2)将酯酶基因est424插入表达载体，构建携带所述酯酶基因est424的重组表达载体；

3)将步骤2)获得重组表达载体与伴侣蛋白质粒pKJE7共转化到感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞中；

4)选取转化后大肠杆菌BL21(DE3)中的阳性克隆于培养基中进行发酵培养；

5)离心后收集发酵后的大肠杆菌BL21(DE3)细胞，并重悬于裂解缓冲液中进行裂解；

6)将步骤5)中裂解的悬液离心，收集上清液，用镍离子螯合树脂进行亲和纯化，再使用脱盐柱脱盐，即得含有SEQIDNo.1中碱基所示序列的可溶性酯酶est424。

4.按权利要求3所述中温碱性脂酶基因的构建方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述表达载体为pET28。

5.按权利要求3所述中温碱性脂酶基因的构建方法，其特征在于：所述步骤4)中培养基为含有100μg/mL卡那霉素和20μg/mL氯霉素的LB培养基；所述发酵条件为：温度37℃，摇床培养至OD₆₀₀为0.4-0.6，加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.5mmol/L，在16℃条件下培养24小时。

6.如权利要求4所述中温碱性脂酶基因的构建方法，其特征在于：所述步骤6)中离心为12000g，离心30min，4℃。

7.一种权利要求1所述的中温碱性脂酶基因的应用，其特征在于：所述中温碱性脂酶基因在催化酯类及衍生物底物的水解反应中的应用。

8.一种重组表达载体，其特征在于：表达载体包含有如SEQIDNO.1所示核苷酸序列的功能片段。

9.一种重组细胞，其特征在于：宿主菌包含有SEQIDNO.2的中温碱性脂酶基因编码的蛋白。