[发明专利]用于区分恶性浆膜腔积液中间皮细胞与癌细胞的酸性磷酸酶染色法及其应用

权利要求书

1.一种用于区分恶性浆膜腔积液中间皮细胞与癌细胞的酸性磷酸酶染色试剂盒，所述试剂盒包括固定液、染色液、盐酸品红、亚硝酸钠、醋酸钠溶液、核复染液、蒸馏水。

2.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的具体组成如下所示：

(1)固定液：5-10％福尔马林

(2)染色液：5-20g/l，萘酚AS-BI磷酸盐溶于二甲基甲酰胺

(3)盐酸品红：2-10％盐酸品红

(4)亚硝酸钠：0.1-0.4MNaNO₂

(5)醋酸钠溶液：2-5M，pH4.5-5.5

(6)蒸馏水

(7)核复染液：苏木素2.5g，无水酒精20ml，硫酸铝钾5g，蒸馏水330ml，碘酸钠250mg，甘油150ml，冰醋酸10ml。

3.权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶标液基细胞保存液，所述酶标液基细胞保存液的具体组成如下所示：

(1)15％甲醇

(2)0.1mMEDTA

(3)0.1mMNaCl

(4)0.01M醋酸钠缓冲液，pH5.2

(5)5％Proclin300

(6)ddH₂O。

4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒在制备用于区分恶性浆膜腔积液中间皮细胞与癌细胞的辅助诊断试剂中的用途。

5.使用权利要求1-3任一项所述的试剂盒区分恶性浆膜腔积液中间皮细胞与癌细胞的酸性磷酸酶染色方法，其特征在于：所述方法的步骤如下：

(1)细胞涂片制片：常规抽取的胸腹水或心包积液约15ml，2000rpm离心10min，小心移去上清，取上层细胞涂片，待细胞半干；

或液基细胞制片：常规抽取的胸腹水或心包积液约15ml，2000rpm离心10min，小心移去上清，应用酶标液基细胞学保存液洗涤并制片，待细胞半干；

(2)固定：半干的细胞涂片置于固定液中常温固定4min，可以去除红细胞；

(3)自来水流水冲洗2min；

(4)酸性磷酸酶染色：25ml蒸馏水中加入0.5ml盐酸品红溶液、1.5ml萘酚溶液、0.5ml亚硝酸钠溶液、1.5ml醋酸钠溶液，作为酸性磷酸酶染色液，将细胞涂片置于上述酸性磷酸酶染色液中，37摄氏度染色5-10min；

(5)自来水流水冲洗2min；

(6)核复染液中染色5min；

(7)自来水流水冲洗2min；

(8)彻底风干后中性树胶封片。