[发明专利]一种前列腺癌核酸疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸疫苗，特别涉及一种前列腺癌核酸疫苗。

背景技术

前列腺癌发病率在全世界范围内呈现增长趋势，成为人类健康的一大威胁。未发生转移的前列腺癌通过化疗与放疗等治疗可以较为有效地抑制肿瘤发展，病人可以获得比较理想的生存率。但对于复发和转移性前列腺癌，在经过传统的治疗方法后，绝大多数会发展成为去势难治性前列腺癌(CRPC)，此时，现有的治疗手段无法有效地控制肿瘤发展，因而患者的生存率非常低。因此，临床上急需要一种全新有效的治疗手段来治疗CRPC。

在过去的十几年里，免疫治疗作为肿瘤治疗的新手段受到了越来越多的关注。其中抗肿瘤DNA疫苗由于其独特的优势发展迅速，多种针对人类肿瘤的DNA疫苗已经进入了临床试验阶段，有的已经被批准应用于动物肿瘤的治疗。前列腺癌的免疫治疗方法研究进展相对缓慢，前列腺癌表达多种肿瘤相关抗原(TAA)，如前列腺特异性抗原PSA、前列腺特异性膜抗原PSMA、前列腺酸性磷酸酶PAP、前列腺干细胞抗原PSCA等。这些肿瘤相关抗原有可能为免疫治疗提供多种靶点。另外，前列腺癌患者血清中PSA浓度在早期便会发生变化，这使得早期治疗成为可能。同时，循环血液中可以检测到与前列腺TAAs发生反应的T细胞，这说明对这些抗原的自我耐受是可以克服的。肿瘤DNA疫苗的要达到的关键目标就是引发机体的细胞介导的免疫反应，主要是激活肿瘤相关抗原(TAA)特异性的杀伤性T淋巴细胞(CTLs)，然后这些抗原特异性的淋巴细胞通过杀伤表达肿瘤相关抗原(TAA)的细胞而达到治疗作用。这意味着如果DNA疫苗如果能引发机体足够强的免疫反应，攻克去势难治性的前列腺癌将成为可能。要使DNA疫苗起到较好的效果，抗原的选择尤为重要。

以前列腺特异性抗原PSCA、PAP、PSMA、PSA都含有前列腺癌免疫治疗的良好靶点(表位)。但是，其各有优缺点，单独使用都能起到一定的作用，但效果不明显，且尚不知PSCA、PAP、PSMA、PSA所含有的具体有功能的表位及其融合表达效果。

如今，前列腺癌DNA疫苗已经从实验室实验进入了临床试验阶段，并且已经取得了一定的进展，但是，目前的前列腺癌DNA疫苗应用于临床效果不明显，甚至只存在理论上的效果，没有实际使用效果。

发明内容

本发明是为了克服上述现有技术中缺陷，通过前列腺癌抗原PSCA，PAP，PSMA，PSA相关表位的融合制成一种前列腺癌核酸疫苗。

一种前列腺癌核酸疫苗，所述核酸疫苗由前列腺癌抗原PSCA，PAP，PSMA，PSA的能够诱发CD8+T细胞免疫应答的覆盖HLA-A2表位的区域融合而成，其上游融合表达FLT3L的信号肽及胞外区，其下游融合表达CD40L。

所述前列腺癌核酸疫苗的基因序列如核苷酸序列表SEQIDNO:1所示。

包含上述的前列腺癌核酸疫苗的质粒载体。

所述质粒载体的原始质粒载体为pSVK1。

包含上述的质粒载体的真核表达细胞。

所述真核表达细胞的原始细胞为293T细胞。

上述前列腺癌核酸疫苗在制备抗前列腺癌的药物中的应用。

所述药物包括上述前列腺癌核酸疫苗和共刺激佐剂，所述共刺激佐剂包括细胞因子，趋化因子和细菌毒素。

优选的，所述细胞因子为细胞因子GM-CSF和B7.1。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明设计了一种新型的将前列腺癌4种常见抗原进行融合表达的核酸疫苗,同时辅以各种共刺激分子和分子内佐剂，提高了该核酸疫苗的免疫原性，增强其抗肿瘤免疫效果。通过实验结果可以看出，该融合表达模式的核酸疫苗，免疫后的小鼠能够同时诱导抗体反应和细胞免疫，并且单从数据来看，疫苗组免疫后诱导的免疫反应非常强烈,尤其是能够诱导强烈的细胞免疫反应，这对于疫苗的抗肿瘤效果是至关重要的。

附图说明

图1是pUC57-FL+4P+CD40L质粒双酶切鉴定图；

图中，M:5000DNAmarke；1：pUC57-FL+4P+CD40L质粒；2：pUC57-FL+4P+CD40L质粒BamHⅠ和MfeI双酶切。

图2是pVAX-GB质粒酶切线性化鉴定图；

图中，M:5000DNAmarke；1：pVAX-GB质粒；2：pVAX-GB质粒BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切。