[发明专利]从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草素和虫草多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及虫草素和虫草多糖提取工艺，具体地说，涉及一种从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草素和虫草多糖的方法。

背景技术

蛹虫草(Cordycepsmilitaris)又名北冬虫夏草、北虫草等，是我国名贵的药用真菌，蛹虫草子实体是蛹虫草主要的食用、药用部分。

目前固体培养方式已被广泛用于蛹虫草的培养，蛹虫草固体培养基中富含菌丝，但因没有成熟的工艺对其中的有效成分进行提取分离，目前在培养结束后固体培养基都被作为废物弃掉，不仅造成资源的浪费，对环境也造成一定的影响。

随着生活节奏的加快和生活水平的提高，人们越来越注重自身保健，虫草多糖具有抗肿瘤、降糖、抗肝纤维化及提高免疫功能，虫草素具有抗菌，消炎、抗氧化、调节人体内分泌和增强人体免疫功能等显著作用，虫草素、虫草多糖等蛹虫草成分提取物在医药市场的前景良好。同时随着人工培养蛹虫草产业规模的不断扩大,，对于如何将培养过程中的副产物变废为宝，提高投入产出比越来越受到关注。

发明内容

本发明的目的是提供一种从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草素和虫草多糖的方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草素和虫草多糖的方法，包括对蛹虫草固体培养基残基进行干燥、粉碎、水提、微滤、浓缩、冻干及定性定量检测等步骤。

其中，干燥步骤具体为：将蛹虫草固体培养基残基置于热风循环干燥箱内于≤80℃条件下烘干2h。

粉碎步骤具体为：干燥后培养基残基用万能粉碎机进行粉碎，过120目筛。

水提步骤具体为：向粉碎后的培养基残基中加水进行热回流提取，料水比按g：mL计为1：15。于65℃提取2次，2h/次，每次提取料水比按g：mL计为1：15，合并2次提取液。

水提最佳条件通过设计正交实验，分别设置提取温度(分别于65℃、75℃、85℃)、提取次数(分别提取1次、2次、3次)，单次提取时间(1h/次、2h/次、3h/次)等因素。获得的虫草多糖与虫草素最佳提取条件为：于65℃提取2次，2h/次，每次提取料水比按g：mL计为1：15。

微滤步骤具体为：收集水提后的提取液，降至室温后6000rpm离心30min，取上清液用0.02μm陶瓷膜过滤，其截留分子量大小为10000-100000Da，收集滤液。

浓缩步骤具体为：将滤液用超滤膜浓缩的方式(超滤设备)浓缩至原体积的1/5，收集浓缩液。

本发明采用真空冷冻干燥的方法于-20℃冻干6h。

本发明还包括采用HPLC方法对冻干粉末中的虫草素以及采用苯酚-硫酸法对虫草多糖进行定性定量检测的步骤。

经检测，采用本发明方法从100g蛹虫草固体培养基残基中能提取约2.92g虫草素和约4.21g虫草多糖。

本发明以蛹虫草固体培养基残基为原料，采用正交试验设计等方法对利用蛹虫草固体培养基残基提取虫草多糖与虫草素的各种工艺条件进行分析，并确定出最佳的提取方法。

本发明方法粗提率高，操作方便，能够最大限度地利用蛹虫草培养基残基，利于工业化生产，可带来良好的社会效益、经济效益和环境效益。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

以下实施例中涉及的蛹虫草固体培养基残基源自湖南炎帝生物工程有限公司常德子公司。0.02μm陶瓷膜(截留分子量大小为10000-100000Da)购自上海华膜实业有限公司。超滤设备购自莱特莱德超滤设备有限公司。

实施例1从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草素和虫草多糖的方法

本方法包括对蛹虫草固体培养基残基进行干燥、粉碎、水提、微滤、浓缩、冻干及定性定量检测等步骤。

1、干燥：蛹虫草固体培养基残基使用热风循环干燥箱温度在≤80℃的条件下干燥2h。

2、粉碎：将烘干的物料用万能粉碎机分别进行粉碎，过120目筛。

3、水提：将粉碎后的培养基残基加水于65℃进行热回流提取2次，2h/次，每次提取料水比按g：mL计为1：15。

4、微滤：将提取液降温后以6000rpm离心30min，然后用陶瓷膜过滤，收集滤液。

5、浓缩：将滤液倒入超滤设备中浓缩至原体积的1/5，收集浓缩液。

6、冻干：用真空冷冻干燥的方法(-20℃冻干6h)对浓缩液进行干燥。