[发明专利]一种铁皮石斛干细胞的培养方法及其应用有效
申请号: | 201510770456.0 | 申请日: | 2015-11-11 |
公开(公告)号: | CN105238736B | 公开(公告)日: | 2018-10-02 |
发明(设计)人: | 韩晓菲;林倩如;苏永军 | 申请(专利权)人: | 大连大学 |
主分类号: | C12N5/04 | 分类号: | C12N5/04;A61K36/8984;A61K8/97;A61P39/06;A61Q19/08 |
代理公司: | 大连智高专利事务所(特殊普通合伙) 21235 | 代理人: | 李猛 |
地址: | 116622 辽宁省*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 铁皮 石斛 干细胞 培养 方法 及其 应用 | ||
1.一种铁皮石斛干细胞的培养方法,具体步骤如下:
1)取切除根冠的铁皮石斛根尖,清洗,灭菌消毒;
2)将步骤1得到的铁皮石斛根尖切成5mm小块,接种至筛选培养基上,培养温度为25-29℃,避光培养5-10天,获得形成层来源的铁皮石斛干细胞;所述筛选培养基为含有0.01-0.5mg/L的6-BA、0.01-0.8mg/L的TDZ和0.01-0.8mg/L的三十烷醇的B5培养基,
3)将形成层来源的铁皮石斛干细胞转移至液态培养基中培养增殖;所述液态培养基为含有0.01-0.5mg/L的6-BA、5-20mg/L的蔗糖、0.01-0.8mg/L的甲基茉莉酮酸酯和0.01-0.8mg/L的三十烷醇的B5培养基;
4)将步骤3) 培养收集的形成层来源的铁皮石斛干细胞移入气升式生物反应器内扩大培养,培养液使用步骤3) 的液态培养液,在常温下不断搅拌;培养5天后过滤收获铁皮石斛干细胞。
2.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,所述筛选培养基为含有0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的TDZ和0.05mg/L的三十烷醇的B5培养基,pH值为6.7。
3.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,所述液态培养基为含有0.1mg/L的6-BA、15mg/L的蔗糖、0.5mg/L的甲基茉莉酮酸酯和0.1mg/L的三十烷醇的B5培养基,pH值为6.2。
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