[发明专利]一种用于军团菌快速检测与分型的引物及方法

说明书

本发明属于微生物分子检测领域，尤其涉及一种用于军团菌快速检测与分型的引物及方法。本发明提供的用于军团菌快速检测与分型的引物，包括军团菌属特异引物、嗜肺军团菌特异引物、嗜肺军团菌血清型1型特异引物、长滩军团菌特异引物、麦氏军团菌特异引物、博兹曼军团菌特异引物、杜氏军团菌特异引物和菲氏军团菌特异引物。本发明提供的用于军团菌快速检测与分型的引物，不仅能够检测军团菌属细菌，还可将检出的军团菌分型为六个种和1个血清型的军团菌，具有特异性好和准确性高的优点，可以极大的提高检测效率。

技术领域

本发明属于微生物分子检测领域，尤其涉及一种用于军团菌快速检测与分型的引物及方法。

背景技术

军团菌（Legionella）是一种兼性细胞内寄生菌，广泛存在于自然界、人工水体和土壤环境中。目前已经确认的军团菌属有58种，包括有70多个血清型，并不断有新的菌种从环境中分离出来。现代研究发现，约有一半的军团菌种与人类疾病有关，其中约90%军团菌感染是由嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）引起，其中以血清型1型的嗜肺军团菌（Legionella pneumophila serogroup1）感染居多，占所有军团菌感染病例的85%左右。除此之外，约10%的军团菌感染由非嗜肺军团菌导致。在非嗜肺军团菌感染中，60%的感染病例由麦氏军团菌（Legionella micdadei）引起，其次为杜氏军团菌（Legionella domoffii），博兹曼军团菌（Legionella bozemanae），长滩军团菌(Legionella longbeachae)和菲氏军团菌(Legionella feeleii)等引起。

尽管在全球范围内的非嗜肺军团菌感染病例中，大部分由麦氏军团菌感染引起，但是长滩军团菌感染在一定的区域内占据主导，如澳大利亚，新西兰，泰国，日本等地军团菌感染病例中长滩军团菌感染占所有军团菌感染病例的30-50%。军团菌通过空气以气溶胶的形式感染人，引起军团菌性肺炎，严重威胁人类的健康。因此，建立一种能检测军团菌并能将检出的军团菌分型为常见致病性军团菌的方法具有重要的临床意义。

目前军团菌感染及军团菌的检测方法主要有血清抗体检测、尿可溶性抗原检测、军团菌分离培养等。但是上述的检测方法存在检测时间长、阳性率低、培养基的配置复杂和价格昂贵的缺陷，不利于军团菌的快速检测。近年来，分子生物学的发展为微生物的分类鉴定工作提供了较简便和准确的方法。多重PCR 方法具有很高的特异性与敏感性，其主要是通过检测军团菌中的特异基因，以达到快速检测军团菌的目的。

中国专利CN102140514B公开了一种检测嗜肺军团菌多种血清型致病菌特异性引物及试剂盒，所述试剂盒可同时检测5种血清型嗜肺军团菌，而且该检测方法周期短、速度快、可操作性强，其检测结果与经提取得到的DNA作为模板扩增所得的结果一致，是一种理想的嗜肺军团菌多种血清型致病菌的检测方法。但是，该检测方法的检测对象只针对嗜肺军团菌，不利于对非嗜肺军团菌的检测。

中国专利申请201410607389.6公开了一种快速区分非嗜肺、嗜肺与嗜肺I型军团菌的三重PCR检测方法，所述检测方法主要是针对军团菌种属、嗜肺军团菌种和嗜肺军团菌I型的16SrRNA、danI和ORF9三个基因的引物，对dNTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化，建立快速区分非嗜肺、嗜肺与嗜肺I型军团菌的三重PCR方法，该检测方法可以对分离培养到的军团菌菌株进行快速有效的判定。但是，该检测方法只对特定军团菌菌株进行分型，检测范围较狭窄，而且特异性不强，不利于该检测方法的推广和应用。

发明内容

为解决现有技术中军团菌的检测方法存在检测范围窄、特异性不强的缺陷，本发明提供了一种用于军团菌快速检测与分型的引物及方法，以解决上述问题。