[发明专利]一种牛抑制素α亚基成熟肽基因及重组表达蛋白质的方法

说明书

本发明提供一种从牛卵巢中提取的牛抑制素α亚基成熟肽基因及其编码的蛋白质，其多核苷酸序列是SEQ ID NO：1，氨基酸序列是SEQ ID NO：2。提供了含有这种牛抑制素α亚基成熟肽基因和pET32a(+)载体的牛抑制素α亚基成熟肽基因的重组表达载体及其构建方法，提供了牛抑制素α亚基成熟肽重组表达蛋白质的诱导和制备方法。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，涉及一种牛抑制素α亚基成熟肽基因，牛pET32a(+)-matpeptide重组载体和pET32a(+)-matpeptide-E.coli BL21(DE3)工程菌的构建、重组蛋白质的诱导表达方法和纯化方法、以及制备多克隆抗体和免疫性检测的方法。

背景技术

超数排卵是胚胎移植的关键技术之一，目前常用的超排药物主要是FSH，但由于超排是一项复杂的生理过程，加之FSH生产厂家批号不同以及动物个体的差异，致使生产中FSH超排效果不稳定。同时，由于FSH在体内半衰期较短，需要频繁注射给药。与FSH法超排相比,采用抑制素免疫进行超排处理不仅提高排卵率,而且提供了更多的可移植胚胎，同时避免了激素残留问题。

抑制素是一种糖蛋白类激素，主要来源于动物性腺中，自20世纪80年代以来，先后在许多动物的卵泡液和精液中发现抑制素的存在，并分离成功。目前认为其主要生理功能是在下丘脑—垂体—性腺轴中起重要的调控作用，反馈性的抑制垂体FSH的释放，调控动物的生殖活动。近年来，人们利用各种来源的抑制素或人工合成的抑制素片段为免疫原主动或被动免疫雌性动物，均发现不同程度的提高排卵数和产仔数。抑制素的生理作用是可以抑制体内FSH合成和分泌，并可通过复杂的反馈调节机制从而调节机体体液水平，从而对卵巢上卵泡发育起到调控作用。因此，对动物体进行免疫抑制素可以在体内产生抗抑制素抗体，从而中和内源性抑制素，使FSH的合成和分泌不受抑制，从而增加血液中FSH的含量，而且抑制素免疫可以直接阻止排卵前FSH的降解，相对上升了FSH水平，提高排卵数。现有技术中，重组抑制素试验均诱导出包涵体蛋白，包涵体蛋白在后续试验操作中需要对蛋白进行复性处理，且复性后的蛋白无天然活性，这大大增加了试验难度与成本。

发明内容

本发明从牛卵巢中提取牛抑制素成熟肽基因序列，进行载体构建，通过优化诱导表达抑制素重组可溶性蛋白的最适宜表达条件，使得可溶性蛋白表达量大。此外，本发明克服了现有技术中其他重组抑制素均诱导出包涵体蛋白的缺陷，使得诱导出的可溶性蛋白在蛋白纯化时不需复性处理，且蛋白构象具有天然活性，这大大降低了技术难度与成本，更有利于产业化。本发明制备的牛抑制素重组α亚基重组蛋白质具有较好的反应原性。本发明制备的牛抑制素重组α亚基抗体具有较高的免疫原性。

本发明的一个目的是提供一种从牛卵巢中提取的牛抑制素α亚基成熟肽基因，其多核苷酸序列是SEQ ID NO：1。并且提供了该基因编码的牛抑制素α亚基成熟肽重组蛋白质，其氨基酸序列是SEQ ID NO：2。

本发明的再一个目的是提供一种含有牛抑制素α亚基成熟肽基因的表达载体、构建该基因表达载体的方法以及利用该表达载体转化的重组基因工程菌。

本发明的第三个目的是提供牛抑制素α亚基成熟肽重组表达蛋白质的高效诱导表达方法、纯化该重组蛋白质的方法。

本发明的第四目的是提供牛抑制素α亚基成熟肽重组蛋白在兔体内制备多克隆抗体、确定最佳免疫剂量及免疫次数的方法。

本发明上述发明目的是通过下面的技术方案实现的：

一方面，本发明从牛卵巢中提取出牛抑制素α亚基成熟肽基因，其多核苷酸序列是SEQ ID NO：1。提供了该基因编码的牛抑制素α亚基成熟肽重组蛋白质，其氨基酸序列是SEQID NO：2。