[发明专利]一种用于结核杆菌检测的痰液处理液

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于结核杆菌检测的痰液处理液，用于肺结核高危人群普查、农村肺结核筛查以及临床结核病诊断，属于体外诊断试剂领域。

背景技术

结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。中国是全球22个结核病高发国之一，西太平洋地区70%的结核病人在中国。据卫生部调查显示，全国约有5.5亿人感染结核杆菌，现有活动性肺结核病人450万，其中具有传染性的病人150万，每年新增结核病患者约130万。中国80%的病人分布在农村，75%的病人为青壮年。我国一年死于结核病的人数达到13万，与死于交通事故的人数相当，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4×0.4μm。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸（mycolicacid）包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘埃上保持传染性8～10天，在干燥痰内可存活6～8个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热62～63℃15分钟或70℃3分钟即被杀死。结核分枝杆菌对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法，以5%石炭酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。结核杆菌的检测与预防是降低结核病的发病率和死亡率的关键。目前检测结核杆菌的方法主要有病原学方法、免疫学方法和分子生物学方法。

病原学检测是目前唯一的结核病确诊方法，病原学方法主要有两种：一、痰涂片法。这是全世界结核病实验室都在使用的最基本的细菌学检查方法，具有快速简便且价廉等优点，涂片方法有以下几种：1、抗酸染色法。经典方法，临床广泛使用。2、荧光法。用荧光显微镜，可以提高工作效率。3、联染法。用抗酸染色法与荧光染色法结合使用。痰涂片法是临床诊断快速廉价易行的方法，但是传统的痰涂片法阳性率太低。无法标准化，受检测者的技术和责任心影响较大。二、痰培养方法。结核杆菌常规培养法的优点是灵敏度、特异度、正确率较高，是鉴定死、活菌的可靠方法，是目前活菌检测不可替代的方法，也是化疗反应的主要监测指标;缺点是培养时间过长，需要４-８周才能报告结果，新出的快速培养法，仪器价格昂贵且需进口液体培养基，费用高，不利推广。

目前临床的痰涂片检测方式是取得痰液样本后，取其中一部分直接涂片染色镜检，由于痰液样本粘性物质多、流动性不好、含有人体脱落的细胞且可能存在的结核杆菌数量受限，该办法无法将痰液中的所有细菌有效收集于玻片上。因此，如果采取相应的办法或试剂将痰液进行液化处理释放结核杆菌，同时裂解其中的人体脱落细胞，这样就可以通过简单的离心处理将全部的结核杆菌收集起来进行制片。不仅增加了显微镜下的细菌视野密度，同时也排除了粘液以及人体脱落细胞的干扰，极大提高了诊断灵敏度。

发明内容

为了解决痰涂片实际应用中的缺点，发明人通过大量的研究及筛选实验，获得了创新的痰液处理液配方，该处理液具有使用安全、不含危险化学试剂；生物安全性好、在液化痰液的过程中快速灭活样本中的病原微生物；集菌效果好，可以一次处理大量的痰液，达到浓缩细菌的目的；操作方便，常温操作、常温运输等优点。

利用该发明中的痰液处理液处理痰液，在简单的混匀过程中，痰液很快即可澄清，痰液样本中的病原得到彻底灭活同时裂解其中的人体脱落细胞而保持结核杆菌的形态完整，并且制片后，玻片上附着的结核杆菌与下游的抗酸染色、荧光染色或联合染色操作完全匹配。

具体实施方式

本发明的具体实施例如下（配制100ml处理液）：

1.取蒸馏水65毫升，放入量杯中，分别量取硼酸0.6g、EDTA二钠0.1g、SDS0.1g,加入量杯中搅拌10分钟充分溶解。

2.分别取无水乙醇10毫升、异丙醇20毫升、粘液溶解剂5毫升加入量杯中搅拌5分钟混均。