[发明专利]一种pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体及制备方法，属于纳微材料制备领域。

背景技术

传统疫苗是灭活或低活性的病原体，在使用过程中存在安全隐患。新型疫苗(如DNA、蛋白质疫苗等)安全有效，但易被酶降解且免疫原性较弱，需要借助其他手段保护疫苗并刺激免疫应答。传统疫苗佐剂对这些抗原无效，因此急待开发新型疫苗载体。

铝盐是第一个被批准可用于人的佐剂。铝盐佐剂(Al(OH)₃)能有效刺激B细胞介导的体液免疫反应，但其具体作用机制尚不清楚。通常认为是氢氧化铝溶胶对疫苗的缓释作用以及氢氧化铝本身对巨噬细胞的刺激作用。有研究者认为氢氧化铝对巨噬细胞的刺激作用归根于Al(III)。因此，基于Al(III)且具有抗原缓释作用的疫苗载体将可能有效的刺激体液免疫反应。

然而，铝盐佐剂对细胞免疫无效，不能作为细胞病原体疫苗的佐剂，例如HIV、疟疾和肺结核等疾病的疫苗。此外，铝盐佐剂与高纯度蛋白质抗原使用时抗体应答反应较弱。因此，设计制备新型的疫苗佐剂，实现蛋白质疫苗体内高效呈递仍是一项艰巨的任务。微颗粒型佐剂(0.1～10μm)模仿了细菌和病毒的尺寸，能与树突状细胞相互作用，从而活化树突状细胞并提高抗原的细胞呈递。目前，基于Al(III)与鞣酸的配位作用制备微囊型蛋白质疫苗载体的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体。

本发明的第二个目的是提供一种pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的制备方法，包括如下步骤：

(1)将蛋白质模拟抗原加入到10mL、0.2～0.5M碳酸钠水溶液中，使模拟抗原浓度为0.5～5mg/mL，溶解后倒入等体积的含有聚苯乙烯磺酸钠的氯化钙水溶液中，所述聚苯乙烯磺酸钠的浓度为1～6mg/mL，氯化钙的浓度为0.2～0.5M，搅拌20～60s，离心，去离子水洗2～4次，得到含有模拟抗原的碳酸钙颗粒；

(2)将步骤(1)获得的含有模拟抗原的碳酸钙颗粒分散于20mL去离子水中，加入0.5～1.5mL、8～24mM的鞣酸水溶液，振荡使分散均匀，加入与鞣酸水溶液等体积、等浓度的氯化铝水溶液，振荡使分散均匀，加入20mL、pH＝8.0的3-(N-吗啉)丙磺酸钠盐缓冲溶液调节pH为8.0，振荡1～5min，离心，颗粒用去离子水洗2～4次，用20～40mL、pH＝8.0的EDTA水溶液洗涤3～5次，去除碳酸钙，用去离子水清洗，得到pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体。

蛋白质模拟抗原优选鸡卵清白蛋白。

上述方法制备的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体。

本发明的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体直径4±0.5μm，厚度约17±2nm，鸡卵清白蛋白包埋于微囊空腔内。由于Al(III)与鞣酸配位键受pH影响，使得微囊具有pH响应性。本发明制备过程在室温水相下进行，条件温和，保证了蛋白质疫苗的活性及载体的使用安全性；原料廉价易得，制备工艺简单易行。

附图说明

图1为实施例1所制得的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的扫描电子显微镜照片。

图2为实施例1所制得的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的透射电子显微镜照片。

图3为实施例1所制得的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的元素能谱图。

图4为实施例1所制得的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的原子力显微镜照片及其高度差图。其中A为原子力显微镜照片；B为高度差图。

图5为实施例2所制得的pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体在不同pH下鸡卵清白蛋白的释放曲线。

实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种pH响应性微囊型蛋白质疫苗载体的制备方法，包括如下步骤：

(1)将10mL、0.33M碳酸钠水溶液倒入等体积含有聚苯乙烯磺酸钠的氯化钙水溶液中，所述聚苯乙烯磺酸钠的浓度为2mg/mL，氯化钙的浓度为0.33M，搅拌30s，离心，去离子水洗3次，得到碳酸钙颗粒；