[发明专利]一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法

权利要求书

1.一种用高效液相色谱法分离测定恩格列净及其有关物质的方法，包括以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，流动相由有机相和水相组成，所述有机相为甲醇和乙腈混合溶液，所述水相为磷酸溶液或磷酸盐缓冲液，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为2～6，进行梯度洗脱，以紫外检测器进行检测，供试品溶液通过将恩格列原料药或其药物组合物加流动相配制成含恩格列净0.4~0.8mg/ml的溶液，定量计算采用不加校正因子的主成分对照品法，其中，所述梯度洗脱包括水相与有机相的洗脱初始体积比为65∶35～45∶55，水相与有机相的洗脱终止体积比为35∶65～15∶85。

2.根据权利要求1所述的方法，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为3.5。

3.根据权利要求1或2所述的方法，所述磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸二氢铵。

4.根据权利要求1或2所述的方法，水相中磷酸盐浓度为：0～0.005mol/L。

5.根据权利要求1所述的方法，有机相中，甲醇与乙腈的体积比为50：50。

6.根据权利要求1所述的方法，所述梯度洗脱包括：0min至第18～24min时，流动相中水相与有机相的体积比为60∶40～50∶50；第18～24min至第48～54min时，水相与有机相的体积比匀速变化至30∶70～20∶80；第48～54min至第58～64min时水相与有机相的体积比保持比例不变。

7.根据权利要求6所述的方法，所述梯度洗脱包括：0min至第19.5min时，流动相中水相与有机相的体积比为55∶45；第19.5min至第50min时，水相与有机相的体积比匀速变化到25∶75；第50min至第60min时水相与有机相的体积保持比例25∶75不变。

8.根据权利要求1所述的方法，进一步包括以下步骤：

（1）取恩格列净原料药或其药物组合物，加流动相使恩格列净完全溶解并稀释定容，配制成每1ml溶液中含恩格列净0.4～0.8mg，滤过，作为供试品溶液；

（2）以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为20～30℃，波长为200～250nm；

（3）取供试品溶液10～30μl，注入高效液相色谱仪；

（4）将水相pH2～6的磷酸溶液或磷酸盐缓冲液与有机相甲醇、乙腈混合溶液以65∶35～45∶55为初始体积比洗脱至主峰出来后，逐渐增大有机相比例，至水相与有机相的体积比达到 35∶65～15∶85并保持不少于10分钟，完成恩格列净有关物质的测定；

（5）采用不加校正因子的主成分对照品法以峰面积计算恩格列净的纯度及有关物质中各单一杂质含量及有关物质总量。

9.根据权利要求8所述的方法，步骤（1）中，每1ml溶液中含恩格列净0.8mg，或步骤（2）中流速为1.0ml/min，柱温为25℃，波长为224nm，或步骤（3）中，取供试品溶液20μl，或步骤（4）中水相为pH3.5的磷酸溶液或磷酸盐缓冲液，水相与有机相的初始体积比为55∶45，洗脱至主峰出来后，逐渐增大有机相比例，至水相与有机相的体积比达到25∶75。