[发明专利]一种巨核祖细胞的分离方法在审
| 申请号： | 201510788264.2 | 申请日： | 2015-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN105255831A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;李丽娟;万桦 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 巨核祖 细胞 分离 方法 | ||
1.一种CD126-/Lin-细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：分离获得脐血中的单个核细胞，以rhG-CSF刺激培养；
步骤2：所述刺激培养获得的细胞经免疫磁珠分离筛选得到Lin-细胞；
步骤3：所述Lin-细胞经免疫磁珠分离筛选得到CD126-/Lin-细胞。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述rhG-CSF在刺激培养的培养基中的浓度为50ng/mL～100ng/mL。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述刺激培养的条件为37℃，CO2浓度为5％，时间为3～7天。
4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述刺激培养的培养基为StemSpanSFEM无血清培养基。
5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述刺激培养的单个核细胞的接种密度为1×106个/mL。
6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤2中所述免疫磁珠分离的抗体为CD2抗体、CD3抗体、CD5抗体、CD14抗体、CD16抗体、CD19抗体、CD24抗体、CD41抗体、CD66b抗体及GlycophorinA抗体的混合物。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤3中所述免疫磁珠分离的抗体为CD126抗体。
8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述单个核细胞的制备方法包括：
步骤1：经抗凝处理的脐血与羟乙基淀粉溶液混合，去除红细胞，获得上清液；
步骤2：所述上清液与淋巴细胞分离液混合后，经离心收集单个核细胞。
9.根据权利要求8所述的分离方法，其特征在于，所述羟乙基淀粉溶液中包括羟乙基淀粉和氯化钠，其中羟乙基淀粉的浓度为60g/L；氯化钠的浓度为9g/L。
10.根据权利要求8所述的分离方法，其特征在于，所述经抗凝处理的脐血与羟乙基淀粉溶液的体积比为(2～6)：1。
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