[发明专利]检测粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗器械生物类免疫体外诊断领域，特别是涉及一种检测粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法。

背景技术

IgE抗体介导的I型过敏反应性疾病相当普遍，世界各国变态反应疾病的总发病率约为15%-30%，我国大约有5-10%的人受过敏原的袭扰，是当前世界性的重大卫生学问题，被世界卫生组织（WHO）列为二十一世纪重点防治的三大疾病之一。

过敏性疾病是患者吸入、摄食入或者注入含有致敏成分的物质（称为过敏原或变应原，Allergen）后触发机体的B细胞产生特异性免疫球蛋白E（ImmunoglobulinE,IgE），从而引发过敏反应（或称变态反应，Allergy）的疾病及相关症状，如过敏性哮喘、枯草热、荨麻疹、过敏性鼻炎、湿疹、结膜炎及胃肠道I型过敏性疾病及严重过敏反应等。上述过敏性疾病的发生，IgE抗体起关键作用。

粉尘螨中重要的致敏蛋白组分为Derf1和Derf2。尘螨既有共同的过敏原组分，也有种属特异性的过敏原组分。螨的一些致敏蛋白组分与无脊椎动物具有广泛的交叉反应性。

在国内，粉尘螨过敏原特异性IgE抗体（D2）检测临床上主要以国外进口试剂和免疫组化试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产粉尘螨过敏原特异性IgE抗体（D2）免疫化学发光检测试剂盒目前还没有。

因此，有待开发对粉尘螨过敏原特异性IgE抗体（D2）检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种检测粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法，该试剂盒性能可靠，灵敏度高，线性范围宽，可配合全自动仪器使用，能提高检测灵敏度及可靠性，并降低成本，延长有效期。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒，包括的试剂有：校准品、质控品、生物素标记的粉尘螨过敏原溶液、碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液。

在本发明一个较佳实施例中，所述生物素标记的粉尘螨过敏原溶液的浓度为0.1~1.0ug/ml；所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0.1~1.0mg/ml；所述碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液的浓度为0.1~2.0ug/ml。

在本发明一个较佳实施例中，所述校准品的浓度为：0IU/ml、0.35IU/ml、0.7IU/ml、3.5IU/ml、17.5IU/ml、50IU/ml、100IU/ml，所述校准品是IgE蛋白与0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制得到的；所述质控品的浓度为：0.7IU/ml、17.5IU/ml，所述质控品是IgE蛋白与0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制得到的。

在本发明一个较佳实施例中，所述粉尘螨过敏原为能与人体内粉尘螨特异性IgE蛋白结合的抗原，所述生物素标记的粉尘螨过敏原溶液的制备过程为：将粉尘螨过敏原按1:20摩尔比加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，再用0.1M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液透析得到。

在本发明一个较佳实施例中，所述标记的鼠抗人IgE二抗为能与人体内IgE蛋白特异结合的抗体，所述碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液的制备过程为：将浓度为1.0-5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液与鼠抗人IgE二抗按摩尔比为2-10：1进行混合后并纯化，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平衡并洗脱，再紫外检测和记录纯化图谱，再用0.05M、pH值为6.0的MES缓冲液对碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE抗体稀释。

在本发明一个较佳实施例中，所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备过程为：将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀，再用0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液重悬，混匀磁分离沉淀，并重复清洗，清洗后的纳米磁微粒分散于0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。

提供一种纳米磁微粒化学发光法定量检测血清粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的方法，包括步骤为：

（1）将磁微粒试剂、生物素标记的粉尘螨过敏原和待检样本混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第二溶液；

（3）向所述第二溶液中加入发光底物并反应，测发光强度；