[发明专利]一种抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及磁微粒化学发光免疫诊断领域，特别是涉及一种抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

自身免疫性肝病是一类原因不明的慢性肝病，主要包括3种与自身免疫密切相关的，以肝、胆损伤为主的疾病：自身免疫性肝炎(Autoimmunehepatitis;AIH)、原发性胆汁性肝硬化(Primarybiliarycirrhosis;PBC)和原发性硬化性胆管炎(Primaryscleroticcholangitis;PSC)，自身免疫性肝病的诊断主要依靠病史、临床表现、体征和实验室检查结果。每种自身免疫性肝病都具有特征性自身抗体谱，自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断、分型及鉴别诊断具有重要意义。近年来，国外对自身免疫性肝病相关自身抗体谱靶抗原性质、临床诊断应用价值（尤其是无症状期的早期诊断）、疾病临床特点及活动性的关系等方面研究进展迅速。

抗gp210（Glucoprotein210）抗体的靶抗原为位于核孔复合物上的210KD跨膜糖蛋白，所识别的表位是gp210羧基末端上的15个氨基酸残基。该自身抗体被一致认为是PBC的高度特异性抗体。以gp210抗原决定簇的重组蛋白或合成多肽作为抗原，应用免疫印迹法或ELISA法检测抗gp210抗体，其诊断PBC的特异性可高达99％，敏感性为10％～41％。约1／4(10％～40％)的PBC患者中，抗gp210抗体可与AMA同时出现，抗gp210抗体也存在于20％～47％AMA阴性的PBC患者中。抗gp210抗体的存在及抗体滴度一般不随患者诊断的时间及临床过程而变化，但抗体阳性与阴性患者的预后有显著性差异，阳性患者死于肝衰竭者明显多于阴性者。抗gp210抗体可能作为一种独立的预后指标，阳性提示患者预后不良。

对于抗gp210抗体的检测方法主要为间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着不足之处：

一、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体，与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

（1）运用此法是可能出现假阳性。

（2）在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。

（3）操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室。

（4）荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。

（5）结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。

二、酶联免疫吸附法

ELISA检测抗gp210抗体，简便易行，特异性高，与间接免疫荧光法联合检测，可为临床对PBC的诊断和治疗提供更为客观的实验依据。但与其他生物检测或免疫检测比较，这种ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限，这些不足主要包括以下几个方面：

（1）检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果；

（2）ELISA方法多采用辣根过氧化物酶进行检测，其检测范围和灵敏度都较低。

（3）ELISA方法的检测时间通常反应是一件较长，完成一个测试所需的总时间一般在2个小时以上，不能完全满足临床上的快速诊断的需求。

（4）ELISA方法不能随机进样检测，检测结果存在滞后性。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种抗gp210抗体检测试剂盒及其检测方法，具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种抗gp210抗体检测试剂盒，包括生物素化gp210抗原、AP-抗人IgG抗体、校准品、质控品、磁微粒试剂、化学发光底物和清洗液，所述生物素化gp210抗原为偶联有生物素的gp210抗原，所述AP-抗人IgG抗体为碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体，所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬浮液。

在本发明一个较佳实施例中，所述生物素化gp210抗原是生物素与gp210抗原分子表面的-NH₂基团反应得到的。

在本发明一个较佳实施例中，所述AP-抗人IgG抗体是碱性磷酸酶AP与抗人IgG抗体偶联得到的。