[发明专利]一种跟腱来源肌腱干细胞原代分离消化液及分离方法有效
| 申请号： | 201510790265.0 | 申请日： | 2015-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN105255825B | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;黄幸;李平 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 刘雪花 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 消化液 消化 表面活性剂 跟腱 振荡 原代分离 肌腱 干细胞 酶溶液 组织块 细胞状态 剪切力 细胞 保证 | ||
1.一种跟腱来源肌腱干细胞原代分离消化液，其特征在于，所述消化液由含表面活性剂的I型胶原酶溶液组成；
所述消化液中I型胶原酶的浓度为1-5mg/mL；
所述表面活性剂为泊洛沙姆，且所述表面活性剂的含量为10-30mg/mL。
2.根据权利要求1所述的跟腱来源肌腱干细胞原代分离消化液，其特征在于，所述消化液中I型胶原酶的浓度为3mg/mL。
3.一种跟腱来源肌腱干细胞原代分离方法，其特征在于，用权利要求1-2任一项所述的消化液振荡消化跟腱组织；
所述消化液振荡消化跟腱组织的振荡转速为100-175rpm，消化时间为20-40min。
4.根据权利要求3所述的跟腱来源肌腱干细胞原代分离方法，其特征在于，所述跟腱来源肌腱干细胞的原代分离方法，包括以下步骤：
S1、将跟腱组织碎块与上述消化液混合，100-175rpm消化20-40min；
S2、过滤获得单细胞悬液，250-500g离心5min，弃上清，用完全培养基重悬细胞沉淀，转入培养皿中，于37℃，5％CO2环境下培养，每3d补液一次，培养至细胞贴壁，贴壁细胞即为根据来源肌腱干细胞原代细胞。
5.根据权利要求4所述的跟腱来源肌腱干细胞原代分离方法，其特征在于，消化液中泊洛沙姆浓度为20mg/mL，I型胶原酶浓度为3mg/mL；在37℃、150rpm条件下消化30min。
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