[发明专利]一种实验室快速检测转抗草甘膦基因棉花方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测转基因棉花领域，具体涉及一种实验室快速检测转抗草甘膦基因棉花方法。

背景技术

目前，国内对转抗草甘膦基因棉花的检测主要采取两种方法，分子检测和生物学检测。常用的抗草甘膦棉花分子检测主要是检测相应基因片段的大小及插入位点等，分子检测需要专业分子生物学技术人员来操作，通常需要专业仪器进行分子标记检测、southern杂交检测、western杂交检测等等。生物学检测周期长，需要将其种入大田，在棉花生长季节中多次喷施草甘膦2‰以检测不同生长阶段的耐受性，检测效果较易受到周围环境及自然因素的影响造成检测的较大差异；所需种子量较多，较难以在早期获得转基因植株收到极少量种子时检测。

发明内容

本发明为了解决现有检测转抗草甘膦基因棉花技术繁琐、周期长、准确度低、耗资多、所需种子量大等问题，提供了一种实验室快速检测转抗草甘膦基因棉花的方法。

为了解决背景技术中所存在的问题，它具体包括以下操作流程：

步骤一、种子的准备：种子经硫酸脱绒→晾干→选取生长健壮的种子适当量放入三角瓶→加入占种子总重75％的乙醇消毒30s→再放入占种子总重15％的过氧化氢中消毒3-4h→无菌水中洗3次；

步骤二、检测培养基的制备：MS(524)粉末、硝酸钾、有机元素、葡萄糖，调节pH值至5.8，添加琼脂作为凝固剂，琼脂的浓度为7g/L，高压灭菌15分钟；检测培养基中添加草甘膦的浓度依次为1‰、0.8‰、0.6‰、0.4‰、0.2‰、0.1‰、0。

步骤三、播种：无菌操作台上把种子剥去外壳→放入检测培养基上(每个三角瓶中放入3粒种子)→三角瓶封口后放于培养架光照培养5-7天；

步骤四、检测：依棉花植株生长受损情况进行检测。

由于采用了以上技术方案，本发明具有以下有益效果：

(1)不抗草甘膦棉花只有在不加草甘膦的培养基上能够正常生长，在添加任何浓度草甘膦的培养基上都表现出严重生长不良。抗草甘膦棉花在不加草甘膦及草甘膦浓度为0.4‰、0.2‰、0.1‰时，生长差异不大，均未受影响，0.6‰浓度时表现较明显受抑制表型，0.8‰和1‰浓度时抑制更加明显。因此，可将0.6‰的浓度作为实验室快速筛选抗草甘膦棉花的浓度；

(2)这种方法简单，使用种子少，时间短，能快速在实验室进行检测，耗资也低。

附图说明

为了更清楚地说明本发明，下面将结合附图对实施例作简单的介绍。

图1是75％乙醇消毒棉花种子；

图2是15％过氧化氢消毒棉花种子；

图3是无菌水浸泡棉花种子；

图4是棉花种子去壳播种于培养基；

图5是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0的培养基中发育情况；

图6是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.1‰的培养基中发育情况；

图7是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.2‰的培养基中发育情况；

图8是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.4‰的培养基中发育情况；

图9是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.6‰的培养基中发育情况；

图10是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.8‰的培养基中发育情况；

图11是不抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为1‰的培养基中发育情况；

图12是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0的培养基中发育情况；

图13是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.‰的培养基中发育情况；

图14是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.2‰的培养基中发育情况；

图15是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.4‰的培养基中发育情况；

图16是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.6‰的培养基中发育情况；

图17是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为0.8‰的培养基中发育情况；

图18是抗草甘膦棉花在草甘膦浓度为1‰的培养基中发育情况。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

一种实验室快速检测转抗草甘膦基因棉花方法，它具体包括以下操作流程：

步骤一、种子的准备：种子经硫酸脱绒→晾干→选取生长健壮的种子适当量放入三角瓶→加入75％乙醇消毒30s(参看图1)→再放入15％过氧化氢中消毒3-4h(参看图2)→无菌水中洗3次(参看图3)；