[发明专利]一种对嗜水气单胞菌易感性相关的中华鳖微卫星序列及其应用

说明书

本发明涉及一种对嗜水气单胞菌易感性相关的中华鳖微卫星序列及其应用，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1，引物序列为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，本发明开发出了一种适用于嗜水气单胞菌易感型个体筛选的中华鳖微卫星序列及引物，本发明人还基于微卫星的核酸序列设计了特异性的引物，且本发明发现该微卫星序列分子标记和嗜水气单胞菌易感性相关，通过基因型分析的方式可筛选出对嗜水气单胞菌易感中华鳖个体，本发明筛选出的1个微卫星位点具有高度多态性和稳定性，可进一步应用于中华鳖分子辅助育种。

技术领域

本发明属于分子生物学DNA标记技术领域，具体涉及一种对嗜水气单胞菌易感的中华鳖微卫星序列及其应用。

背景技术

中华鳖，又称甲鱼、王八、水鱼、元鱼、团鱼、脚鱼和老鳖，英文名Chinese Soft-shelled Turtle,拉丁文名(Pelodiscus sinensis)，中国除宁夏、新疆、青海及西藏未见报道外，其余各省、市、自治区均有分布，以长江流域和华南地区为多见；国外分布于日本、朝鲜和越南。中华鳖由于其药用价值和营养价值，长期被大量消耗，而品种是中华鳖养殖的物质基础之一(品种、饲料、水质)，良种的选择和育种是增产的有效途径，同时也可以间接起到节能减排的作用。一般认为，在其它条件相同的情况下，使用优良品种可增产20～30％，因此要发展“高产、优质、高效”的中华鳖养殖业，对良种的选育应该引起足够的重视。遗传改良或品种培育是中华鳖养殖发展的动力，研究表明，遗传变异水平与生物的生长速度、抗嗜水气单胞菌能力与生产性状密切相关，因此，本发明欲建立一种筛选方式，将中华鳖对嗜水气单胞菌易感的个体用微卫星序列微卫星分子标记进行检测，微卫星序列微卫星标记的基本原理是根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率，再通过关联分析判断其对嗜水气单胞菌的易感性，进一步应用于分子辅助育种。

分子标记辅助选育(MAS)是遗传育种中的重要环要节之一，它的原理是根据与某一性状紧密相连的分子标记的出现来对目标性状的基因型进行选择，MAS在鉴定优良亲本，筛选早期优良性个体，加快育种进程中发挥了重要作用。微卫星标记由于具有多态性丰富、遵循孟德尔分离定律，共显性遗传、易于PCR扩增、条带易于识别等多种优点成为开发的首选。微卫星(Microsatellites)又称简单序列重复序列(Simple sequence repeats，SSR)，是真核生物基因组中广泛分布的简单重复DNA片段，一般由2～6个核苷酸为基本单位组成，其中，最常见的是双核苷酸重复，如((AC/TG)n及(AG/TC)n。不同的生物个体由于基本单位重复次数的不同以及重复程度的不完全形成了微卫星位点的长度多态性而显示出多态性。研究表明，可能是DNA复制过程中的“链滑(strand slippage)现象造成微卫星DNA多态性信息容量(polymorphic information content，PIC) 较高。微卫星DNA的高突变性、共显性表达及其在真核生物基因组中的普遍性，目前己被广泛用于遗传多样性分析，亲缘关系鉴定，连锁图谱构建，功能基因定位，分子标记选育等研究领域，由于每个微卫星两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，可根据其两端设计特异性引物，通过PCR技术来扩增相应位点的微卫星序列，再经电泳分析，即可显示不同个体基因型微卫星的多态性，而且，微卫星在基因组中分布密度很大，表现出高度的多态性和共显性遗传，能为种质资源的保护、合理的人工增养殖、人工放流方案的制定提供评价依据。因此，研究对嗜水气单胞菌易感的中华鳖，有益于研究嗜水气单胞菌的发病机理，并为后期建立抗菌群体奠定基础。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种对嗜水气单胞菌易感的中华鳖微卫星位点及引物,即提供1对对嗜水气单胞菌易感的中华鳖微卫星位点,以及相应的多态性微卫星引物，从而为中华鳖筛选对嗜水气单胞菌易感的个体选育提供分子标记。

本发明所要解决的另一个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种微卫星位点为分子标记在鉴定中华鳖对嗜水气单胞菌易感个体中的应用。