[发明专利]1型鸭甲肝病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201510792192.9 | 申请日： | 2015-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN105256072A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 汪铭书;胡琴;程安春;杨乔;朱德康;贾仁勇;陈舜;孙昆峰;刘马蜂;吴英;陈孝跃 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲肝 病毒 taqman 荧光 定量 rt pcr 检测 试剂盒 方法 | ||
1.1型鸭甲肝病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测引物对、探针，其特征在于，所述引物对由核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的下游引物组成，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。
2.含有权利要求1所述1型鸭甲肝病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测引物对、探针的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒反应液按总体积20μL计，由以下组分组成：2×onestepRT-PCRBufferⅢ10μL，RTEnzymeMixⅡ0.4μL，E×TaqHSDNA聚合酶0.4μL，20pmol/μL的上、下游引物各0.4μL，10pmol/μL的探针0.8μL，DHAV-1RNA模板2μL，最后用RNaseFreedH2O补至20μL。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照和阳性对照，所述阳性对照为DHAV-1的RNA，所述阴性对照为健康鸭肝脏RNA、健康鸭胚尿囊液及胚体RNA。
5.利用权利要求2～4任一项所述试剂盒检测1型鸭甲肝病毒的方法，其特征在于，荧光定量RT-PCR的反应条件为42℃5min，95℃10s(一个循环)；95℃5s，54℃15s，反应进行45个循环，于54℃进行荧光信号采集；用FQ-PCR仪自带软件自动分析读取FQ-PCR检测结果，若出现Ct<35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中含有1型鸭甲肝病毒；若未出现Ct<35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中不含有1型鸭甲肝病毒。
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