[发明专利]一种高灵敏度检测癌细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及癌细胞的检测方法，尤其涉及一种基于Fe-MIL-101-FA材料制备用于比色方法检测癌细胞。

背景技术

肿瘤的发生严重威胁着人们的生命安全，已成为是一种常见的致死性疾病，其发病率有逐年升高的趋势，癌症的检测已成为全世界研究的热点之一，实现肿瘤准确，灵敏，简便检测对于疾病的治疗具有非常重要的意义。

目前，采取的检测手段多为酶联免疫分析法，该方法通过检测肿瘤细胞标志物间接检测肿瘤细胞，因此灵敏度较低，难以早期发现并防治；研究者还利用细胞计数，聚合酶链式反应，化学发光法，计时电流法以及流式细胞术等方法进行癌细胞检测，但这些方法分析成本高，耗时长，操作繁琐。

近年来以叶酸靶向癌细胞通过材料的过氧化物酶活性催化过氧化氢氧化底物发生颜色变化，通过比色定量检测癌细胞的研究已经开展，Y.Tao利用氧化石墨烯和金纳米簇复合材料（GO-AuNCs）与叶酸共价偶联形成新型检测材料（Adv.Mater.2013,25,2594-2599），利用GO-AuNCs的过氧化物酶活性和叶酸受体靶向性实现癌细胞的检测，最低能检测出1000个乳腺癌（MCF-7）细胞；G.Wang报道壳聚糖修饰的卤化银纳米材料与叶酸偶联（ACSAppl.Mater.Inter.2014,6,6434-6442），在可见光照射下利用过氧化氢氧化TMB底物发生颜色变化，从而达到检测癌细胞的目的，其最低检测1000个MDA-MB-231乳腺癌癌细胞。Y.Song合成出氧化石墨烯偶联叶酸和氯高铁血红素（Chem.Commun.,2011，47,4436-4438），通过比色法检测癌细胞，最低能检测出1000个癌细胞，但此材料含有过氧化物酶（氯高铁血红素）。L.Zhang将铂纳米颗粒负载在氧化石墨烯上（PtNPs/GO），并与叶酸共价偶联，利用PtNPs/GO的过氧化物酶活性以及叶酸对肿瘤细胞的靶向性检测MCF-7乳腺癌细胞（Anal.Chem.,2014,86(5),2711-2718），最低检测限达30个癌细胞。发明专利（CN103913453A）公开了Au@PtPd偶联叶酸靶向叶酸高表达的癌细胞，Au@PtPd纳米材料能催化过氧化氢氧化显色剂发生颜色变化，通过色谱层析，晾干后利用扫描仪扫描，对所呈现颜色进行色度分析，此方法操作比较繁琐，且最低检测200个K562细胞。以上方法都是通过贵金属或合金通共价偶联连接叶酸，利用叶酸对癌细胞的靶向性和材料的过氧化物酶活性产生颜色变化的比色法检测癌细胞。

还有文献报道具有过氧化物酶活性的材料偶联抗体检测癌细胞的方法，例如I.M.Kim将磁性纳米颗粒和贵金属铂与氧化石墨烯偶联（GO_MNP/Pt），磁性纳米颗粒和铂能增强氧化石墨烯的过氧化物酶活性，在材料表面接上抗体HER2，能检测HER2过表达的癌细胞，此材料最低能检测100个乳腺癌（SKBR-3）细胞（Nanoscale2014,6(3),1529-1536）；但此法应用抗体，成本较高，且不易保存。

以上这些文献和专利中的检测癌细胞的材料为贵金属材料、氧化石墨烯和金属的复合材料或是合金材料，除了氧化石墨烯和金纳米簇复合材料（GO-AuNCs）在酸性条件和中性条件下都具有良好的模拟酶活性外，其余材料在中性条件下的模拟酶活性均未研究过。而本专利中的检测癌细胞的材料属于金属有机骨架化合物（即MOFs材料），在酸性和中性条件下具有较高的模拟酶活性，且通过叶酸表面修饰后应用于检测癌细胞，能特异性识别癌细胞并与正常细胞区分开来。与上述材料相比，MOFs材料具有高比表面积、水热稳定性高、结构稳定，并且在酸性和中性条件下都具有较高过氧化物酶活性的优势。