[发明专利]一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺

权利要求书

1.一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：在乳酸菌对数生长期间的8-30小时且乳酸浓度达到5-30g/L时，按照如下步骤进行：步骤1，在蠕动泵的作用下，发酵液从发酵罐流出，经过管道流入离子交换器色谱柱；步骤2，在离子交换器色谱柱内，由离子交换树脂对发酵液中的乳酸进行吸附，形成高密度发酵液；步骤3，高密度发酵液回流至发酵罐；步骤4，当乳酸浓度大于等于5g/L时，返回步骤1继续进行循环，当乳酸浓度小于5g/L时，循环停止并继续进行步骤5；步骤5，对高密度发酵液进行制备，形成冻干菌粉。

2.根据权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：在所述的步骤1前，对离子交换树脂及管道进行灭菌。

3.根据权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的对高密度发酵液进行制备的步骤如下：步骤a，将高密度发酵液经5000-12000g离心浓缩，形成菌体浓缩液；步骤b，在菌体浓缩液内添加保护剂溶液并混合形成菌体混合液，菌体浓缩液与保护剂溶液的重量比例为1：1-5；步骤c，将菌体混合液冷冻干燥，形成冻干菌粉，冻干菌粉中活菌数在8.0×10¹¹cfu/g以上。

4.根据权利要求3所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的保护剂溶液由保护剂和蒸馏水按重量比例为18.6-44：1000的配比溶解而成。

5.根据权利要求4所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的保护剂为单糖、双糖、多糖、氨基酸、维生素及核苷酸中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的离子交换树脂的用量为发酵液的0.1-5%。

7.根据权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的循环速度为每分钟50-200ml，每循环3-10h后，采用新的离子交换器色谱柱更换已经使用的离子交换器色谱柱，更换次数为2-4次。

8.根据权利要求7所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的已经使用的离子交换器色谱柱采用浓度为2mol/L的硫酸进行洗脱回收乳酸，采用去离子水洗涤离子交换树脂。

9.根据权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的发酵液按照如下方法制备：在35-45℃温度下，菌种在液体培养基内进行6-24小时的活化后，转接入发酵培养基并形成发酵液，所述的液体培养基的制备方法如下：5-30g/L的葡萄糖，0.5-5g/L的酵母提取物，5-20g/L的蛋白胨，1-5g/L的无水乙酸钠，1-5g/L的磷酸氢二钾，0.1-0.5g/L的MgSO₄·7H₂O，0.01-0.05g/L的MnSO₄·H₂O混合后，经110-121℃的温度灭菌15-30分钟，冷却至室温；所述的发酵培养基的制备方法如下：100g/L的蔗糖，30g/L的酵母提取物，10g/L的蛋白胨，2g/L的硫酸钠，2g/L的无水乙酸钠，2g/L的磷酸氢二钾，0.3g/L的MgSO₄·7H₂O，0.03g/L的MnSO₄·H₂O或100g/L的蔗糖、5g/L的酵母提取物、10g/L的蛋白胨、10g/L牛肉膏浸粉、2g/L的硫酸钠、2g/L的无水乙酸钠、2g/L的磷酸氢二钾、0.1g/L的MgSO₄·7H₂O、0.03g/L的MnSO₄·H₂O混合后，经121℃的温度灭菌20分钟后，冷却至室温。

10.根据权利要求1所述的一种乳酸菌高密度发酵与乳酸物理法分离偶联的生产工艺，其特征在于：所述的乳酸菌为嗜热链球菌。