[发明专利]一种绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)外植体的取材与消毒：取绵毛马兜铃剪切成2-3cm的带芽茎段或l-2cm长的茎尖，作为外植体进行消毒，首先将2-3滴洗洁精滴入装50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌2min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗8-10min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒6-8min、无菌水冲洗3-5次，最后放置在消毒好的不锈钢碟子，剪切成1.0-1.5cm长的带芽茎段，获得无菌外植体；

(2)无菌试管苗的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导发芽得到无菌试管苗，所述诱导培养基以MS为基本培养基，添加5g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，0.5mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤，培养基pH值为5.8，培养条件为：温度为22-24℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为15-20d；

(3)试管苗增殖培养：将无菌试管苗置于增殖培养基中进行培养获得大量不定芽，所述增殖培养基以MS为基本培养基，添加5g·L^-1琼脂，20g·L^-1蔗糖，0.1-1.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.01-0.5mg·L^-1的萘乙酸，培养基pH值为5.8，培养条件为：温度为22-24℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为30d；

(4)试管苗壮苗培养：将繁殖后的不定芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株，所述壮苗培养基以MS为基本培养基，添加5g·L^-1琼脂，20g·L^-1蔗糖，0.1-1.0mg·L^-1的6-苄基腺嘌呤、0.01-0.5mg·L^-1的萘乙酸，培养基pH值为5.8，培养条件为：温度为22-24℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为30d；

(5)试管苗生根培养：将健壮植株置于生根培养基中培养得到完整的带根苗，所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加5g·L^-1琼脂，20g·L^-1蔗糖，0.5-1.5mg·L^-1的萘乙酸，培养基pH值为5.8，培养条件为：温度为22-24℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为25d；

(6)试管苗炼苗移栽：筛选完整的带根苗进行炼苗后移植于基质中培养，再移栽至大田。

2.根据权利要求1所述的绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法，其特征在于，步骤(6)中的炼苗移栽按以下操作进行：经过步骤(5)获得带根的完整植株，待苗长至5-6cm,根长至2-4cm时，选择生长良好、整齐、健壮的瓶苗，在室温为23-25℃的室内进行炼苗，并在瓶中加水淹没培养基，炼苗5-7d，取出试管苗，洗净根部培养基，移栽到基质中生长40-50d，再移栽至大田。

3.根据权利要求1所述的绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述基质为按珍珠岩：蛭石：泥沙＝1：2；1的比例混合。