[发明专利]用于免疫治疗的制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫治疗领域，具体地，本发明提供了一种免疫治疗制剂。

背景技术

免疫治疗immunotherapy包括免疫细胞的治疗和药物的治疗，免疫细胞的治疗是指把病人的细胞从血里面分离出来，在体外用一些细胞因子，使它变成一种杀伤细胞，再回输到血液中去，这种杀伤细胞可以识别肿瘤细胞进行杀伤。肿瘤细胞免疫疗法全称肿瘤细胞生物基因免疫疗法，其作用不是杀死全部癌症细胞,而是当癌症细胞负荷明显降低时，机体的免疫功能恢复后，通过清除微小的残留病灶或明显抑制了残留癌症细胞增殖的方式来达到治疗癌症的目的。癌症免疫治疗正是通过人为的干预，来调动机体自身的免疫系统对癌细胞进行杀灭和抑制其增殖。

目前，免疫治疗的基本流程通常是用单采机或者普通采一定分量患者自身血液，在GMP实验室里手工Ficoll分离单个核细胞置于培养瓶中，加入培养液和细胞因子刺激细胞活化增殖。经过细胞培养后，回输DC、CIK细胞，经过多个疗程的治疗从而杀除患者体内肿瘤细胞。然而，上述流程存在一些缺陷，例如：(1)手工Ficoll分离血液里的单核细胞，因为依靠人员，所以技术稳定性低，细胞的质量和数量完全依赖技术人员的素质；(2)手工Ficoll方法是开放式操作，容易导致细胞污染；(3)手工Ficoll方法时间比较长，需要平均3小时15分，是工业化的主要瓶颈；(4)自动化仪器主要功能是自动分离血液里的单核细胞后直接进行免疫细胞定向培养扩增后进行肿瘤免疫治疗，并没有用于单核细胞保存用途。

除此之外，现有的免疫治疗是通过采集病人的血液，分离免疫细胞后定向扩增后回输给病人。然而，病人的免疫细胞本身杀灭肿瘤的能力便有缺陷，这导致免疫治疗的效果不甚理想。

综上所述，本领域迫切需要一种疗效好，适合标准化生产，且质量稳定可控的免疫治疗制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种疗效好，适合标准化生产，且质量稳定可控的免疫治疗制剂。

本发明的第一方面，提供了一种免疫治疗制剂的制备方法，所述方法包括步骤：

(i)提供一对象的自体血液样本；

(ii)对部分所述的血液样本进行离心，取上层血浆，与培养基混合，制备成细胞冻存液；

(iii)对剩余的所述血液样本进行血细胞分离，得到细胞样本；

(iv)将所述的细胞样本注入一个或多个容器中，在所述容器中加入步骤(ii)所得到的细胞冻存液，得到所述的免疫治疗制剂。

在另一优选例中，所述的自体血液样本为健康人的血液样本。

在另一优选例中，所述的自体血液样本是从健康人体内采集的，且在所述采集前，对采集对象进行选自下组的一项或多项检查：采血标准检测、肿瘤指标检查、淋巴细胞亚群检测。

在另一优选例中，所述的自体血液样本的含量为150ml。

在另一优选例中，所述的步骤(iii)中，所述的血细胞分离用Sepax 2血细胞分离机进行。

在另一优选例中，所述的步骤(ii)中，所述的上层血浆是通过以下方法制备的：将血液样本加到离心管中，在室温(优选为10-40℃，更优选为20℃)下，2500-3500rpm离心5-15min，吸取上层血浆。

在另一优选例中，所述的对象是治疗对象或采样对象。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：对所述的免疫治疗制剂进行冻存保存。

在另一优选例中，所述的方法还包括步骤：冻存保存后，对所述的免疫治疗制剂进行复苏。

在另一优选例中，所述的复苏通过梯度平衡法进行。

在另一优选例中，所述的梯度平衡法包括：将所述的免疫治疗制剂放入温 水(优选为35-40℃)后取出，在所述试剂内滴加一定量配制的细胞复苏培养液，并且平衡25-35s后，重复滴加步骤和平衡步骤直至细胞悬液样本体积和复苏培养液体积的比例为1:4。

在另一优选例中，所述的自体血液样本为150ml。

本发明的第二方面，提供了一种冻存血细胞分离物制剂，所述的免疫治疗制剂包括以下的组分：分离的血细胞，和冻存液；

其中，所述的分离的血细胞是从健康人体血液样本中分离得到的；

所述的冻存液含有：70-90％(v/v)人血浆，5-15％(v/v)DMSO，以及5-15％(v/v)羟乙基淀粉；

且所述的人血浆与所述的分离的血细胞是从同一血液样本中提取。