[发明专利]检测IgM抗体的胶体金试纸条及试纸卡、制备和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种试纸条，具体涉及一种检测九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体的胶体金试纸条，以及包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒，该胶体金试纸条的制备方法，和使用该胶体金试纸条、胶体金试纸卡或胶体金试剂盒进行检测的方法。

背景技术

目前通过免疫荧光试剂盒检测样品中的九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体是一种成熟的技术，但是所需时间较长。例如，安图生物公司九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒采用间接免疫荧光法原理，在载玻片上(10孔/片)分别包被：1孔包被嗜肺军团菌血清I型，2孔包被McCoy细胞中的肺炎支原体，3孔包被Q热立克次体II相，4孔包被肺炎衣原体(原生小体)，5孔包被HEp-2细胞中的腺病毒，6孔包被HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒，7孔包被LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒，8孔包被LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒，9孔包被LLC-MK2细胞中的副流感病毒1，2和3型，10孔为质控孔。除嗜肺军团菌，载玻片中所有抗原都是从细胞培养物中获得。简单步骤为：稀释血清样本(5min)→加入抗人IgG吸附剂处理血清样本，并离心，(20min)→在载玻片中加入所检测血清样本，并37℃孵育90min→清洗并晾干15min→加兔抗人IgM-FITC结合物，并7℃孵育30min→清洗并晾干15min→加入封闭介质并置于显微镜下观察结果15min，所以检测时间需要约3小时以上。

现有技术中还有其他的检测呼吸道病原体的试剂盒，但这些试剂盒及相关检测方法常需要扩增样品的核酸片段，有的需培养或制备相应的探针溶液，有的还需使用大型仪器设备，如质谱仪、GeXP遗传分析仪等进行检测。这会付出额外的培养时间和反应时间，并且要求有专业人员和昂贵的专业设备相配合才能得以实施，因而检测成本高且效率较低。

胶体金试纸条作为一种快速现场检测技术，操作简便，一般15分钟内即可肉眼读出结果。然而，目前还未见在一个胶体金试纸条上同时检测九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体的报道。

发明内容

因此，本发明的目的在于克服现有技术中的上述缺陷，提供了一种特异性强、检测便捷、价格低廉的检测九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体的胶体金试纸条，还提供了包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒，以及该胶体金试纸条的制备方法和使用该胶体金试纸条、试纸卡或试剂盒进行检测的方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种检测IgM抗体的胶体金试纸条，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试纸条包括在聚氯乙烯(PVC)底板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物垫为包覆有兔抗人IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原(下文中可分别简称为T1～T9线)，所述质控线为二抗(下文中可简称为C线)。以上9条检测线可以以任意顺序排列而不影响检测结果。

本发明涉及的呼吸道感染病原体的相关介绍如下：

肺炎支原体：肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，可在呼吸道粘膜上皮内潜伏，部分患者无明显症状，但大部分患者为显性感染，在3岁以下儿童呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。肺炎支原体肺炎潜伏期为14～21天，起病缓慢，IgM抗体一般在感染后1周出现，3～4周达高峰期，可持续3～6个月。

肺炎衣原体：肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎，在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10％，肺炎衣原体所感染所致的肺炎，症状和体征无特异性，多数起病缓慢，潜伏期一般为30天左右，IgM抗体在发病2～3周出现，一般来说可持续存在2～6个月。

流感病毒：它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。由于它易与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期间临床诊断很困难，因此实验室诊断显得非常重要。流感病毒感染的潜伏期一般为1～7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2～3个月。

副流感：副流感病毒在2～4岁儿童中能引起喉气管支气管炎，潜伏期一般为2～7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2～3个月。