[发明专利]γ-聚谷氨酸的发酵制备及菌株

权利要求书

1.γ-聚谷氨酸的发酵方法或者提高γ-聚谷氨酸发酵产量的方法，其包括：

(1)将产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌(如，HBY-PBS-ZY55)接种入添加了正己烷、吐温-80和/或甜菜碱的发酵培养基中进行发酵培养；

(2)任选在步骤(1)的发酵培养期间进一步添加正己烷；

(3)收集发酵培养物中的γ-聚谷氨酸。

2.权利要求1所述的方法，其中，正己烷的添加量为5-50ml/L，优选为8-30ml/L，更优选为10-20ml/L；吐温-80的添加量为0.1-1ml/L，优选为0.2-0.8ml/L，更优选为0.45-0.55ml/L；和/或，甜菜碱的添加量为0.05-0.5g/L，优选为0.1-0.3g/L，更优选为0.15-0.25g/L。

3.权利要求1所述的方法，其中，发酵培养是短期的，优选发酵培养的时间不超过36小时，更优选为26-36小时，如26-28小时或32-36小时。

4.权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中的产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌是在种子培养基中活化培养而获得的。

5.获得高产(优选是短期发酵高产)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌的方法，其包括：

(1)将待诱变的产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌液体培养(优选培养至OD₆₀₀为10-12)，然后稀释(优选稀释10⁶倍)；

(2)将步骤(1)获得的稀释菌液在黑暗条件下进行紫外照射(优选在30W紫外灯下30cm处照射180秒)；

(3)将步骤(2)获得的经照射的菌液在平板筛选培养基上避光培养；

(4)将步骤(3)培养获得的单菌落分别进行发酵培养(优选短期发酵)；

(5)测量步骤(4)发酵产生的γ-聚谷氨酸的产量，选择出高产(优选是短期发酵高产)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌。

6.权利要求5所述的方法获得的高产(优选是短期发酵高产)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，优选其是于2014年5月20日以保藏编号CCTCCNO.M2014213保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的枯草芽孢杆菌(BacillusSubtillis)HBY-PBS-ZY55。

7.权利要求6所述的枯草芽孢杆菌在γ-聚谷氨酸的发酵(优选是短期发酵)中的应用。

8.权利要求7所述的应用，其中，γ-聚谷氨酸的发酵的方法包括在发酵中维持溶氧量≥10％和/或维持糖(如，葡萄糖)含量为10-15g/L。

9.权利要求7所述的应用，其中γ-聚谷氨酸的发酵的方法是权利要求1-4任一所述的方法。

10.培养基，其组成选自如下配方之一：

(1)葡萄糖60-80g/L，果糖5-10g/L，谷氨酸钠20-40g/L，氯化钙1-1.5g/L，K₂HPO₄1.3-1.8g/L，MgSO₄·7H₂O0.4-0.6g/L，玉米浆干粉5-15g/L，酵母粉5-10g/L，柠檬酸钠10-20g/L，氯化铵10-30g/L，硫酸锰0.05-0.2g/L，硫酸亚铁0.015-0.025g/L，NaCl3-8g/L，pH7.1-7.6；

(2)葡萄糖10-30g/L，酵母提取物5-10g/L，蛋白胨5-15g/L，氯化铵2-5g/L，KH₂PO₄1-5g/L，MgSO₄7H₂O0.2-1g/L，氯化钙0.5-1g/L，NaCl3-8g/L，pH7.1-7.6；

(3)葡萄糖20-40g/L，果糖5-10g/L，谷氨酸钠20-40g/L，氯化钙1-1.5g/L，K₂HPO₄1.3-1.8g/L，MgSO₄·7H₂O0.3-0.8g/L，玉米浆干粉5-15g/L，酵母粉5-15g/L，柠檬酸钠10-20g/L，氯化铵10-30g/L，硫酸锰0.05-0.2g/L，硫酸亚铁0.01-0.03g/L，NaCl3-8g/L，消泡剂0.1-1ml/3L，pH7.1-7.6；

(4)葡萄糖500-1000g/L，MgSO₄·7H₂O2-5g/L，氯化钙2-5g/L，玉米浆干粉15-30g/L；

(5)葡萄糖10-30g/L，果糖5-10g/L，谷氨酸钠5-15g/L，氯化钙1-1.5g/L，K₂HPO₄1.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.3-0.8g/L，玉米浆干粉5-15g/L，酵母粉5-15g/L，柠檬酸钠10-20g/L，氯化铵10-30g/L，硫酸锰0.05-0.2g/L，硫酸亚铁0.02g/L，NaCl3-8g/L，消泡剂0.1-1ml/3L，pH7.1-7.6；

(6)葡萄糖300-1000g/L，MgSO₄·7H₂O2-5g/L，氯化钙2-5g/L，玉米浆干粉15-30g/L,柠檬酸钠10-20g/L，氯化铵10-20g/L,K₂HPO₄1-2g/L。