[发明专利]一种人表皮生长因子的制备方法及增加人表皮生长因子复溶性的药物组合物

权利要求书

1.一种人表皮生长因子的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）超滤浓缩工序:取10L尿液，用50%NaOH调pH，静置1.5h,虹吸上清液，用冰醋酸调节PH值，静置0.5h，将上清液进行超滤浓缩至2L，之后再用冰醋酸调节PH值，最后放于4℃的环境中过夜;

（2）蛋白质等电点沉淀工序:上清液加(NH₄)₂SO₄至饱和，4℃静置,离心后沉淀;

（3）梯度洗脱工艺：用洗脱液A溶解沉淀，搅拌、离心，留取离心液；用洗脱液B平衡阴离子交换柱，将上述离心液上柱；用洗脱液B溶液洗脱柱子；收集洗脱液；洗脱液经超滤膜，超滤，得超滤液；

（4）沉淀

超滤液中加入乙醇沉淀，离心，固体再用无水乙醇脱水两次，离心，弃去上清液，留取沉淀物；

（5）冻干

将沉淀物装入盘进冻干机，冻干即得表皮生长因子。

2.根据权利要求1所述的人表面生长因子的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，用50%NaOH溶液调溶液的PH值为8～9，用冰醋酸调节PH值为6～7，之后再次用冰醋酸调节PH值为4～5。

3.根据权利要求1所述的人表面生长因子的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，4℃静置24～36h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）其中洗脱液A可选用0.01~0.3mol/L醋酸盐缓冲液，在PH值4.0~9.0的条件下洗脱。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）其中洗脱液B可选用0.01~0.5mol/L醋酸钠+0.1~5mol/LNaCl，在PH值3.0~8.0的条件下洗脱。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）其中洗脱液D可选用0.01~0.5mol/L磷酸盐缓冲液，在PH值3.0~8.0的条件下洗脱。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其中选用的阴离子交换柱包括：强阴离子交换柱Q-SephadexA-25,Q-SephadexA-50,Q-SephadexC-25,Q-SephadexC-50;弱阴离子交换柱DEAE-CelluloseDE-22，DEAE-CelluloseDE-23，DEAE-CelluloseDE-51，DEAE-CelluloseDE-52，DEAE-CelluloseDE-53。

8.根据权利要求1~7所述制备的人表皮生长因子，其特征在于：冻干后得到的蛋白质0.61mg，充分证明了人尿是人表皮生长因子的一个可用来源。

9.一种药物组合物，其含有根据权利要求1-8制备的人表皮生长因子作为活性成分,还含有甘油、甘露醇、丙二醇、三乙胺。