[发明专利]一种糜蛋白酶的制备方法及提高糜蛋白酶复溶性的药物组合物

权利要求书

1.一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）原料绞碎，抽提蛋白；（2）分级盐析，得糜蛋白酶粗品；（3）粗品投料，多重结晶；（4）活化；（5）盐析；（6）透析；（7）冻干。

2.权利要求1所述制备方法，其特征在于，各步骤具体为：

（1）将胰脏绞碎，用硫酸溶液浸渍2次；取滤液，加固体硫酸铵，使达40%饱和度，过滤，取滤液；加固体硫酸铵，使达70%饱和度；过滤，取沉淀物；加水溶解，调pH值至4.5～5.5，抽滤，得糜蛋白酶粗品；

（2）结晶工序

糜蛋白酶粗品加水溶解，调pH值至2.5～3.5，静置8～12小时；

结晶：将糜蛋白酶粗品溶解液再调pH值至2.0～3.0；加入饱和硫酸铵溶液，调pH值至4.0～6.0，置25±3℃条件下，保温20～48小时，过滤，收集滤饼；

滤饼加水溶解，重复上述结晶操作3次，收集滤饼；

（3）活化工序

用水溶解上步中所得滤饼，调pH值至7.0～9.0；

加磷酸盐缓冲液，调pH值至7.0～9.0；加入活化剂，活化60～80小时；

（4）盐析工序

活化液调pH值至3.0～5.0，加入固体硫酸铵进行盐析，过滤，收集滤饼；

（5）透析工序

滤饼加水溶解，放透析袋，透析4～6天；

（6）冻干工序

收集、合并透析液，过滤，调节pH值至5.5～6.7，装盘、冻干。

3.根据权利要求2所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述胰脏为牛胰脏或猪胰脏。

4.根据权利要求2所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，饱和硫酸铵溶液与粗品溶液的体积比为1～3。

5.根据权利要求2所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中加入活化剂的比例为3～8mg/100ml料液，活化60～80小时。

6.根据权利要求5所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述活化剂为胰蛋白酶。

7.根据权利要求2所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中活化液按400～600g/L的比例加入固体硫酸铵进行盐析。

8.根据权利要求2所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中，滤饼加水溶解的比例为1～1.5ml/g。

9.根据权利要求2所述的一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（6）中冻干前pH调节为6.0～6.5。

10.一种药物组合物，其含有根据权利要求1-9制备的糜蛋白酶作为活性成分,还含有甘露醇、水解明胶。