[发明专利]一种子宫内膜癌特异性检测的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测子宫内膜癌的试剂盒及其检测方法。

背景技术

子宫内膜癌作为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占女性生殖道恶性肿瘤的20-30%，在某些欧美国家已居女性生殖道恶性肿瘤首位，严重威胁妇女健康。随着社会发展和人类平均寿命的延长，内膜癌发病率逐年上升并伴有年轻化趋势。子宫内膜癌如果能做到早期诊断，合理治疗，其预后一般较好。子宫内膜癌的主要临床表现为不规则阴道流血，与卵巢癌等其他肿瘤不同，临床诊断主要依靠诊断性刮宫，但哺乳期或浸润型子宫内膜癌的患者，其子宫壁薄弱，刮宫时可能会造成穿孔，给患者造成伤害。

CyclophilinA蛋白（CYPA)又称亲环素A(GeneBankNo.NP_066953)，位于胞质及胞核，具有肽酰脯氨酰顺反式异构酶活性，参与蛋白质折叠、装配与运输；在细胞内与环孢素A结合，抑制T细胞活化途径，表现出免疫抑制作用，此外还参与氧化应激诱导及胆固醇代谢过程，并发挥细胞因子的功能。现有技术已经报道，通过检测人亲环素A表达水平来早期诊断子宫内膜癌。因此，检测人亲环素A变得尤为重要。

核酸适体（Aptamer,又称适配体,适配子）是能高亲和性、高特异性的结合某种生物质的单链寡核酸分子（ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systemat1cEvolut1onofL1gandsbyExponent1alenr1chment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异结合CYPA的核酸适体及其试剂盒。

本发明提供的核酸适体，是序列表的序列1-14所示的单链DNA。

所述核酸适体与CYPA蛋白具有较好的亲和能力。

还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。

所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：

a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。

所述核酸适体可用于制备检测CYPA的试剂盒。

利用本发明的核酸适体，可以捕获中唾液中的中的CYPA，从而用于相关子宫内膜癌筛查。利用本发明的核酸适体，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本发明具有很高的应用价值。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1CYPA蛋白的获得

将Genbank：NP_066953所示的CYPA基因通过本领域常规的真核表达方式进行表达，获得了相应的目的多肽蛋白。

实施例2核酸适体的筛选和制备

设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括个核苷酸的随机核酸文库如下：

5‘-ATCGTCACCATGGATACATG(N39)TTGCACAATTGGACAGTTAC-3’；N39代表39个随机核苷酸。