[发明专利]一种禽流感灭活疫苗制备方法

权利要求书

1.一种禽流感灭活疫苗制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)病毒的接种，将禽流感La Sota种毒用灭菌生理盐水作5000倍稀释，尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，37℃孵育；

2)病毒的收获，选取接种后48～120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，收获尿囊腔液，保存于-20℃；按照《中华人民共和国兽药典》规定的半数感染量测定方法，进行病毒含量测定，病毒效价应≥10^8.5EID₅₀/0.1ml；

3)病毒的灭活，向病毒液中加入质量浓度为37％，终浓度为0.07％～0.15％的福尔马林溶液，混匀，37℃摇床中180～200rpm/min灭活16～24小时；

4)乳化即得到禽流感灭活疫苗。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4)所述的乳化包括以下操作：

水相制备：将灭活后的禽流感病毒液通过GQ管式离心机离心，弃去沉淀，将滤过液用截留分子量为300KD的Millipore膜包进行2～3倍浓缩，浓缩后的病毒液即为水相，使用前置于30～32℃水浴锅中进行预热。

油相制备：取进口MONTANIDE^TMISA 206VG佐剂，使用前进行充分混匀，并置于30～32℃水浴中进行预热，即为油相。

将水相和油相按质量比为1:1的比例混合，磁力搅拌装置进行预混合，然后采用ATS Engineering Inc公司AH100D型均质机进行水包油包水型疫苗的乳化，二级阀压力20～30bar，一级阀压力调节至400～500bar，共乳化1～2遍，制备成水包油包水型禽流感灭活疫苗，病毒含量≥10^8.5EID₅₀/0.1ml。