[发明专利]一种农业根结线虫复合生防菌剂的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种农业根结线虫复合生防菌剂的制备方法及其应用，该菌剂是由保藏号为CGMCC No.10026的淡紫拟青霉YT08经固体发酵获得的，其对农业根结线虫病害具有强抑制效果。本发明的固态发酵涉及优选的培养基：干啤酒糟17～30%，麸皮4～8%，花生壳粉碎物3～6%，大豆蛋白胨2～5%，粉末壳聚糖（90%以上的脱乙酰度）2.55～7.5%，蟹壳粉1～2.25%，NaCl 0.2～0.5%，CaCl₂0.1～0.3%，MgSO₄0.1～0.3%，FeSO₄0.05～0.15%，含水量为40～70%。本发明中的制备方法具有原料成本低、易于操作控制、产品功效强和适合工业化生产等特点。

技术领域

本发明涉及一种农业根结线虫复合生防菌剂的制备方法，及其在农业根结线虫生物防治中的应用，属于农业微生物技术领域。

背景技术

植物病虫害是造成农作物减产的重要原因，每年因病虫害减产的损失巨大，其种植者为减少病虫害的发生而使用大量化学农药，进而造成病源生物对化学药物的抗药性增加，形成恶性循环。与此同时，大量使用化学农药造成农作物的品质下降，很多人谈食色变。在此背景下，高效低毒的生物农药逐渐受到广大农民、生产企业及政府的重视，发展有机种植业大势所趋，生物农药存在巨大的市场空间。

植物线虫病是农作物、蔬菜、果树、林木、花卉及药材种植的四大病源生物之一，每年造成世界农业生产的损失约1000亿美元，全球农业上最重要的危害线虫是根结线虫和胞囊线虫，我国较为严重的线虫有根结线虫、大豆胞囊线虫、小麦粒线虫、甘薯茎线虫、水稻干尖线虫、栗线虫、松材线虫等，仅我国农作物种植业线虫病损失就达600亿元。

淡紫拟青霉能广泛寄生于线虫卵，杀虫效果高效，被认为是最具有应用前景的根结线虫生防真菌，该菌具有功效高、寄生广、易培养等特点，特别是在控制植物病源线虫方面功效显著。淡紫拟青霉除了具有杀线虫效果外，还可以寄生半翅目、同翅目、等翅目和鞘翅目及鳞翅目等昆虫，另外对植物病原菌（如玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病和水稻恶苗病等）具有拮抗作用。淡紫拟青霉的次级代谢物也有一定的生理效能，如产生类似吲哚乙酸产物，促进植物根系和植株生长，对种子萌发和生长具有促进作用，还能产生多种功能酶，并具有一定的化学农药降解效应。

淡紫拟青霉作为一种生物制剂，在杀线虫过程中具有安全、高效、持效期长等特点，其杀线虫的活性并不比化学杀线虫剂差，并有促进植物生长的作用。目前研究资料表明，淡紫拟青霉菌剂可用于玉米等十几种经济作物、茄子等多种蔬菜、菊花等大量花卉药材及葡萄等多种果树线虫病的预防和治疗。淡紫拟青霉菌剂与进口的化学杀虫剂相比，杀线虫效果相当或接近，而其生产成本较低且有后效，并具有不污染农产品和环境的优点。淡紫拟青霉类环境友好的杀虫菌剂的研发成功对于我国的食品与农作物安全、农业的可持续发展均具有重要意义。

发明内容

本发明针对上述技术背景及其存在的不足，提供一种农业根结线虫复合生防菌剂的制备方法，及其在农作物根结线虫生物防治中的应用。以淡紫拟青霉YT08 CGMCCNo.10026为出发菌株，经固态发酵的方法生产农业根结线虫复合生防菌剂，在培养过程中添加壳聚糖和蟹壳粉等多种诱导因子，激活该菌株的根结线虫侵染因子的生成量，通过多生防功能因子联合协同作用，提高根结线虫的防治效果。

本发明的目的可以通过如下措施来达到：

1.一株具有防治番茄与葡萄根结线虫病害的淡紫拟青霉，该菌株具有高产壳聚糖酶的特性，其保藏名称为：YT08，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年11月26日，保藏号为CGMCC No.10026，分类命名：淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）。

2. 菌种活化