[发明专利]一种山葡萄种质资源休眠期抗寒性的鉴定方法

权利要求书

1.一种山葡萄种质资源休眠期抗寒性的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将休眠期的山葡萄枝条在不同冷冻温度下冷冻处理后剥去表皮，放入氯代三苯基四氮唑染色液中，置于恒温环境中进行染色处理；

(2)冲去山葡萄枝条表面的染色液，根据山葡萄枝条木质部的染色面积确定染色级别，并根据染色级别计算出山葡萄枝条的染色指数；

(3)根据山葡萄枝条的冷冻温度所对应的染色指数确定低温半致死温度；

步骤(2)中，所述根据山葡萄枝条木质部的染色面积确定染色级别的步骤具体包括：

将山葡萄枝条纵切后，根据山葡萄枝条纵切面木质部的染色面积确定染色级别；

步骤(2)中，所述染色级别的确定方法为：

当木质部纵切面有大于85％的面积呈红色，则所述染色级别为4级；当木质部纵切面有46％～85％的面积呈红色，则所述染色级别为3级；当木质部纵切面有20％～45％的面积呈红色，则所述染色级别为2级；当木质部纵切面有20％以下的面积呈红色，则所述染色级别为1级；

步骤(2)中，所述染色指数＝Σ(染色级别×枝段数)/(枝段总数×最高染色级别)。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述在不同冷冻温度下冷冻处理后剥去表皮之后，放入氯代三苯基四氮唑染色液中之前还包括如下步骤：

将剥去表皮的山葡萄枝条剪成0.3～0.5cm的枝条段。

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述枝条段的数目为10～15个。

4.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述染色处理的温度为28～32℃，染色时间18～24h，且在避光条件下进行。

5.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述氯代三苯基四氮唑染色液的浓度为0.5～1.0％。

6.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述在不同冷冻温度下冷冻处理的步骤具体包括：

将休眠期的山葡萄枝条置于－20～－50℃下冷冻12～15h，后将温度升高至20～30℃，并在这一温度下保持4～6h。

7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于，所述在不同冷冻温度下冷冻处理的步骤具体包括：

按照4～5℃/h的降温速度将山葡萄枝条所处环境的温度降至设定温度，在这一温度下保持12～13h，后逐渐升温至20～30℃，在这一温度下保持4～5h。