[发明专利]一种检测伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱及其制备方法在审
| 申请号： | 201510814243.3 | 申请日： | 2015-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN105424918A | 公开（公告）日： | 2016-03-23 |
| 发明（设计）人： | 生威;王硕;张燕;王俊平;胡高爽 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 李明卓 |
| 地址： | 300457 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 毒素 免疫 亲和 凝胶 及其 制备 方法 | ||
1.一种检测伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱，其特征在于：
凝胶检测柱的原理是利用抗原抗体的特异性结合和辣根过氧化物酶的酶催反应，依据质控层和检测层颜色变化，进而对待测物进行定性半定量分析。
2.根据权利要求1所述的检测伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱，其特征在于：
在一个标准的1mL固相萃取柱内设有两层，上层为伏马毒素抗体胶与封闭胶混合加入形成的检测层，下层为HRP抗体胶与封闭胶混合加入形成的质控层，质控层和检测层之间隔开一个3mm的空气层。
3.一种检测伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱的制备方法，其特征在于：(1)封闭胶的制备，使用溴化氰活化琼脂糖凝胶，之后加入HCl溶液，搅拌溶胀后转移到含有烧结玻璃的柱中，用HCl溶液进行淋洗，再用偶联缓冲液冲洗柱子，调解柱子至中性，加入甘氨酸封闭液室温反应2h，再用偶联缓冲液和醋酸钠缓冲液反复冲洗。待清洗液抽空，将制备好的封闭胶用PBS(含有0.3ml/L的抑菌素)按体积比1:3悬起，放置于4℃保存待用。
(2)抗体胶和HRP的制备方法同封闭胶，差别仅在于封闭之前，在凝胶中加入伏马毒素特异性抗体和HRP抗体，室温偶联2h。
4.根据权利要求3所述的抗体胶和封闭胶制备方法进行检测柱的组装，其特征在于：
制作步骤为将聚乙烯垫片加入1mL的固相萃取柱中，然后加入150μL的HRP抗体胶与封闭胶比例为1:90的混合胶，加入第二层聚乙烯垫片，用注射器活塞将PBS压出，在组装好的质控层上方约3mm处加入第三层聚乙烯垫片，然后加入150μL的伏马毒素抗体胶与封闭胶比例为1:10的混合胶，最后在顶部加入第四层垫片，用注射器活塞将PBS压出。
5.根据权利要求4所述的伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱，其特征在于：所述的伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱检测伏马毒素的检测限为40μg/L。
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