[发明专利]一种厌氧微生物的富集培养方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，特别涉及一种厌氧微生物的富集培养方法。

背景技术

在厌氧微生物培养过程中，往往需要借助厌氧培养装置进行厌氧微生物的富集培养。但厌氧培养箱具有以下不足：(1)运行成本高，需不断充入氮气和混合气体，以维持厌氧培养箱的正常运转；(2)为了防止臭氧的产生，不能用紫外灯照射灭菌；(3)接种时不能在箱内点燃酒精灯；(4)操作繁琐，需带上长臂手套进行操作，很不方便。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种厌氧微生物的富集培养方法，使其能够达到快速、无菌富集厌氧微生物的目的。

具体步骤为：

(1)配置液体培养基溶液，并加入刃天青作为指示剂，当溶液中有溶解氧时显示蓝色或粉红色，无氧状态时显示无色。

(2)将步骤(1)配置的培养基溶液放入高压灭菌锅内于121℃下灭菌20~30min，然后取出放入超净工作台冷却至40~60℃，再加入经过除菌及灭菌的除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐备用。

(3)将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，所得空瓶用无菌水清洗4~6次，然后将清洗后的空瓶放在超净工作台中紫外灭菌20~30min，再向空瓶中注入接种样品和步骤(2)处理过的培养基溶液，接着用注射器抽尽瓶中空气后再充满高纯度氮气，密封状态下放入恒温培养箱中于37℃下培养2~5天，即完成厌氧微生物的富集培养。

所述刃天青在液体培养基溶液中的质量百分比含量为0.1%。

所述除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐在液体培养基溶液中的含量为0.3~0.5g/L。

所述无菌水指的是超纯水或经高压蒸汽灭菌之后的水。

所述接种样品的接种量为1~10%。

所述高纯度氮气的纯度为99.999%。

本发明方法无需借助厌氧培养箱，操作方便快捷，成本低，能够保证全程无菌。

具体实施方式

实施例：

本实施例以富集培养厌氧活性污泥中的硫酸盐还原菌为例，对本发明进行进一步说明。

(1)在1000ml大烧杯中配置1000ml液体培养基溶液，配方如下（g/L）：乳酸钠6、蛋白胨和氯化铵（1:1）1.75、磷酸氢二钾0.05、氯化钠1.0、硫酸镁2.0、硫酸亚铁0.5、氯化钙0.1、氯化钴0.01、氯化锌0.01、维生素C0.5、无水硫酸钠5，指示剂刃天青，pH值6.5。

(2)将步骤(1)配置的培养基溶液放入高压灭菌锅内于121℃下灭菌25min，然后取出放入超净工作台冷却至50℃，再加入用0.22μm滤膜过滤除菌后放入超净工作台中灭菌的除氧剂L-半胱氨酸备用。

(3)将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，所得空瓶用无菌水清洗5次，然后将清洗后的空瓶放在超净工作台中紫外灭菌30min，再向空瓶中注入10ml的厌氧污泥和90ml步骤(2)处理过的培养基溶液，接着用注射器抽尽瓶中空气后再充满高纯度氮气，密封状态下放入恒温培养箱中于37℃下培养4天后发现培养基变黑，且具有硫化氢气味，即完成硫酸盐还原菌的富集培养。

所述刃天青在液体培养基溶液中的质量百分比含量为0.1%。

所述除氧剂L-半胱氨酸在液体培养基溶液中的含量为0.3g/L。

所述无菌水指的是超纯水或经高压蒸汽灭菌之后的水。

所述高纯度氮气的纯度为99.999%。