[发明专利]一种高效联产α-氨基丁酸及二羟基丙酮的策略

权利要求书

1.一种串联甘油脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶重组大肠杆菌用于联产α-氨基丁酸和二羟基丙酮的方法，其特征包括以下内容：

1)将甘油脱氢酶基因与L-氨基酸脱氢酶基因构建重组共表达载体pET-28a-glydh+Bcldh、pET-28a-glydh+Rjpdh及pET-duet-glydh+Bsadh、pET-duet-glydh+Scvdh，并将其转化E.coliBL21，成功构建了基因工程菌pET-28a-glydh+Bcldh/BL21、pET-28a-glydh+Rjpdh/BL21、pET-duet-glydh+Bsadh/BL21、pET-duet-glydh+Scvdh/BL21；

同时将L-苏氨酸脱氨酶ltd基因利用分子技术进行克隆，构建重组表达载体pET-28a-Ecltd和pET-28a-Seltd，并将其转化E.coliBL21，成功构建了基因工程菌pET-28a-Ecltd/BL21及pET-28a-Seltd/BL21；

2)使用重组大肠杆菌在LB培养基进行诱导培养，然后进行全细胞转化；利用pH7.0的50mMPB缓冲液洗涤细胞然后将细胞重新悬浮于pH6.0-8.0的50mMPB缓冲液中，在不加入任何辅因子的情况下，加入0.4ML-苏氨酸、0.4M甘油及0.1-1％的增加细胞通透性的表面活性剂，利用添加化学试剂调节使转化的pH保持在6.0-8.0之间，并控制转化的温度在30℃，制备得到α-氨基丁酸和二羟基丙酮。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘油脱氢酶选自：大肠杆菌来源的甘油脱氢酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的L-氨基酸脱氢酶选自：芽孢杆菌来源的L-亮氨酸脱氢酶、芽孢杆菌来源的L-丙氨酸脱氢酶、链霉菌来源的L-缬氨酸脱氢酶、红球菌来源的L-苯丙氨酸脱氢酶。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的L-苏氨酸脱氨酶选自：大肠杆菌来源的L-苏氨酸脱氨酶、鼠伤寒沙门氏菌来源的L-苏氨酸脱氨酶。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的增加细胞通透性的表面活性剂为：吐温80、甲苯、曲拉通X100、十六烷基三甲基溴化铵即CTAB。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学试剂为碳酸钙、NaOH、或氨水。