[发明专利]一种日本血吸虫重组蛋白SjSAPLP4及其编码基因与应用

说明书

本发明提供了一种日本血吸虫重组蛋白SjSAPLP4及其编码基因与应用。本发明的蛋白具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，或该序列经替换、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。本发明还提供了编码上述蛋白的基因序列。本发明的重组蛋白SjSAPLP4免疫原性好，可作为优良的诊断抗原，用于制备高灵敏度、高特异性的日本血吸虫诊断试剂盒，还可用于制备抗血吸虫疫苗以及作为潜在的药物作用靶点，筛选治疗日本血吸虫病的药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说，涉及一种日本血吸虫重组蛋白SjSAPLP4及其编码基因与应用。

背景技术

血吸虫病是一种严重威胁人类健康的传染性寄生虫疾病，主要流行于亚非拉的76个国家和地区，全球有2亿多人受到感染，另有近8亿人受其感染威胁。我国流行的是日本血吸虫病，经过几十年的不懈努力，我国血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的成就，血吸虫病在流行地区得到了控制，但实现最终消除血吸虫病的目标依然任重而道远。

诊断是血吸虫病防治领域的中心环节。精确的诊断技术不仅对血吸虫病患者的早发现早治疗具有重要临床意义，还可为血吸虫病流行区等级提供判断标准、为评估流行态势和考核防控效果提供必不可少的信息和科学依据。缺乏高效精确的诊断技术是血吸虫病无法彻底消除的一个重要原因。随着我国血吸虫防治工作力度的加大，血吸虫病在我国趋于一种低度感染的流行趋势。这些轻度感染的血吸虫病患者如果不能及时得到确诊和治疗，其排泄物中所含的虫卵将引起血吸虫病的持续流行传播。因此，研发新的具有高灵敏性和特异性的血吸虫病诊断方法势在必行。

目前，血吸虫病的诊断多依赖于寄生虫形态学检测方法，例如世界卫生组织(WHO)推荐的改良加藤法(Kato-Katz)。这种方法主要通过检查病人粪便或尿液中的血吸虫虫卵来诊断疾病，不但费时费力，而且对轻度血吸虫感染诊断的敏感性较低，不适合用于大规模的血吸虫病现场监测。相比于传统的形态学诊断方法，酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmune sorbent assay,ELISA)诊断方法具有操作简便快捷和更高的灵敏性，且可用于大规模现场监测。目前，用于血吸虫病免疫诊断的最常用的抗原是提取血吸虫虫体的成虫抗原组分(Adult worm antigen,AWA)和虫卵抗原组分(Soluble egg antigen,SEA)，由于这两种粗提抗原的成分复杂(由上千种血吸虫蛋白组成)，且与其他寄生虫感染血清存在着较严重的交叉反应，血吸虫病诊断的特异性不高，生产的试剂不宜标准化。

依靠基因工程技术生产的血吸虫重组抗原分子具有成分简明、交叉反应少、可大规模批量生产等优点，被认为是理想的血吸虫病诊断和防治的靶标抗原分子。2014年，我国科学家报道了一个日本血吸虫病免疫诊断标识分子(SjSP-13)，并将其研制为rSP13-ELISA试剂盒，其诊断敏感性比传统形态学方法提高了6倍，该研究成果在国际顶级学术期刊《柳叶刀·传染病》杂志以论著形式在线发表。然而，该诊断试剂盒的敏感性(90％)尚存进一步提升的空间。

本发明利用生物信息学方法对日本血吸虫全基因组编码基因预测分析发现其基因组中存在一个鞘脂激活蛋白样蛋白(Schistosoma japonicum Saposin-like protein，SjSAPLP)家族，该基因家族共有15SjSAPLP基因组成，而SjSP-13即为其中一员。本发明通过序列比对分析发现SjSAPLP家族成员之间的序列同源性极低，其中SjSAPLP4与已报道的SjSP-13之间的氨基酸序列同源性低于30％。在本发明之前，还没有出现涉及本发明日本血吸虫SjSAPLP4重组抗原蛋白及其用于日本血吸虫病诊断的公开报道。本发明将SjSAPLP4和SjSP-13经基因克隆并在大肠杆菌中重组表达，ELISA试验比较分析了两个重组蛋白用于日本血吸虫病的诊断具有高敏感性和特异性，以期寻找敏感度更高、特异性更好的血吸虫病免疫诊断抗原。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种敏感度高、特异性好的日本血吸虫重组蛋白。