[发明专利]一种新来源亚硝酸降解低分子肝素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新来源亚硝酸降解低分子肝素的制备方法，特别涉及一种利用牛来源(牛肺、牛肠)和羊来源(羊肠)肝素通过亚硝酸降解制备低分子肝素的方法，属于原料药制备技术领域。

背景技术

肝素属于一种抗凝血临床药物，可从各种哺乳动物的粘膜组织提取，1916年首先发现于狗的肝脏中，后来为得到高产量又将来源主要转向牛和猪。但由于上世纪末欧洲爆发的“疯牛病”和“羊瘙痒病”由牛与羊传染给人类而致死，进而牛和羊来源肝素被禁用，导致目前肝素类药物原料仅限于猪来源。低分子肝素主要经肝素降解制备而成，具有比肝素生物活性更高，半衰期更长和副作用更少的临床治疗优势，属于一种高效抗血栓药物，而且每年有超过60％的肝素用于制备低分子肝素。目前欧洲药典收录至少五种低分子肝素，但这些低分子肝素均限制为猪来源肝素为原料制备，这样形成了低分子肝素原料来源单一的产业链。这种原料来源单一的市场结构已潜在地威胁肝素类药物市场的稳定。目前“疯牛病”和“羊瘙痒病”已得到有效控制，其来源的肝素经现有的各种纯化技术可保证安全。

根据联合国粮农组织数据显示全球范围内牛和羊的饲养量一直高于猪的饲养量，而猪来源肝素也将无法满足目前老龄化时代的医疗需求。牛和羊将被发展为低分子肝素类药物新的物种来源已是必然。

发明内容

本发明针对亚硝酸降解类低分子肝素药物物种来源单一性的问题，利用新物种来源的肝素通过亚硝酸降解制备低分子肝素。

发明概述

本发明利用从牛、羊体内提取的肝素经亚硝酸降解方法制备两类低分子肝素：那曲肝素钙与达肝素钠，并通过分别与EP标准品进行结构与抗凝活性的比较，从而初步确定以上低分子肝素类药物的临床应用价值。

发明详述

本发明技术方案如下：

那曲肝素钙的制备方法，步骤如下：

(i)将由原料牛肺、牛肠和/或羊肠制备的肝素钠完全溶解于水中，加入亚硝酸钠，肝素钠为亚硝酸钠质量的10～30倍，调pH为2～5，反应80～120分钟，然后调pH至9～12，制得反应液A；

(ii)向步骤(i)制得的反应液A中，加入硼氢化钠，硼氢化钠为肝素钠质量的1～3％，反应4～8小时，盐酸调pH至2～5，混合均匀，再用氢氧化钠调至中性，制得反应液B；

(iii)向步骤(ii)制得的反应液B中，加入3～5倍体积的醇，固液分离，干燥，制得固体A，然后将固体A溶于水中，固体A与水的质量体积比为1：(5～10)，单位g/mL，制得反应液C；

(iv)将步骤(iii)制得的反应液C，通过阳离子交换树脂将钠离子置换为钙离子，制得反应液D；

(v)向步骤(iv)制得的反应液D中加入3～5倍体积的醇，充分混合后，固液分离，经纯化，干燥，制得低分子肝素。

根据本发明优选的，所述步骤(i)中，调pH的酸性pH调节剂为盐酸，碱性pH调节剂为氢氧化钠。

根据本发明优选的，所述步骤(iii)、(v)中的醇为甲醇或乙醇。

根据本发明优选的，所述步骤(iii)、(v)中，固液分离为过滤或离心。

根据本发明优选的，所述步骤(v)中的纯化为透析膜透析或醇沉；根据本发明优选的，所述步骤(v)中，干燥为-50～-60℃冻干。

达肝素钠的制备方法，步骤如下：

(1)将由原料牛肺、牛肠和/或羊肠制备的肝素钠完全溶解于水中，加入亚硝酸钠，肝素钠为亚硝酸钠质量的30～60倍，调pH为2～5，反应50～120分钟，然后调pH至9～12，制得反应液a；

(2)向步骤(1)制得的反应液a中，加入硼氢化钠，硼氢化钠为肝素钠质量的1～2％，反应6～12小时，氢氧化钠调至中性，制得反应液b；

(3)向步骤(2)制得的反应液b中，加入3～5倍体积的醇，固液分离，干燥，制得固体a，然后将固体a溶于水中，固体a与水的质量体积比为1：(5～10)，单位g/mL，制得反应液c；

(4)将步骤(3)制得的反应液c，加入体积百分比为0.8～1.5％的双氧水，经25～30℃氧化10～20小时，制得反应液d；

(5)向步骤(4)制得的反应液d中加入3～5倍体积的醇，充分混合后，固液分离，经纯化，干燥，制得低分子肝素。

根据本发明优选的，所述步骤(1)中，调pH的酸性pH调节剂为盐酸，碱性pH调节剂为氢氧化钠。

根据本发明优选的，所述步骤(3)、(5)的醇溶液为甲醇或乙醇。

根据本发明优选的，所述步骤(3)、(5)中，固液分离为过滤或离心。