[发明专利]一种抗手足口病药物活性检测方法及其试剂盒有效
| 申请号： | 201510822325.2 | 申请日： | 2015-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN105255995B | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 萧伟;曹泽彧;丁玥;曹亮;李娜;丁岗;王振中 | 申请（专利权）人： | 江苏康缘药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12Q1/37 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 222047 江苏省连云港市经济*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 手足口病 蛋白酶 手足口病毒 药物活性检测 检测 荧光素酶 试剂盒 受试物 医药技术领域 荧光素酶质粒 核苷酸序列 干扰因素 酶促反应 生物发光 体外重组 细胞转录 药物活性 药物筛选 萤光素酶 灵敏度 兼容性 荧光素 可用 试品 体外 工作量 筛选 翻译 开发 | ||
1.一种抗手足口病药物活性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
将编码Gln-Gly的核苷酸序列插入荧光素酶质粒，经体外非细胞转录翻译获得含Gln-Gly的重组荧光素酶；
体外重组表达手足口病毒蛋白酶，所述手足口病毒蛋白酶为2A或3C蛋白酶；
在非细胞体系的、pH值为7～8的检测体系下，所述手足口病毒蛋白酶与所述含Gln-Gly的重组荧光素酶、受试物发生酶促反应，检测荧光素的生物发光强度，获得所述受试物的抗手足口病药物活性；
所述手足口病毒选自柯萨奇病毒A2、A4、A5、A7、A9、A10、A16型，柯萨奇病毒B1、B2、B3、B4和B5型，肠道病毒71型，以及埃可病毒。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酶促反应的反应体系为：
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酶促反应的温度为30℃，时间为1～4h。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述受试物的抗手足口病药物活性的获得方法为：根据生物发光强度，获得受试物的抑制率。
5.一种抗手足口病药物活性检测试剂盒，其特征在于，包括：
含Gln-Gly的重组荧光素酶；
手足口病毒蛋白酶；所述手足口病毒蛋白酶为2A或3C蛋白酶；
Hepes缓冲液；
萤光素检测试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述含Gln-Gly的重组荧光素酶为：将编码Gln-Gly的核苷酸序列插入荧光素酶质粒，经体外非细胞转录翻译获得含Gln-Gly的重组荧光素酶。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，编码所述Gln-Gly的核苷酸序列为CAAGGU。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光素酶质粒为pGloSensorTM-10F质粒。
9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述Hepes缓冲液的浓度为10～100mM，pH 7.0～8.0。
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