[发明专利]一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物快速检测技术领域，尤其是涉及一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法。

背景技术

目前，由黄色葡萄球菌引起的食物中毒是越来越多的，据美国疾病控制中心报告表示，由金黄色葡萄球菌引起的细菌性食物中毒是居首位的，占整个细菌性食物中毒的33％，加拿大甚至高达45％。金黄色葡萄球菌是食物中毒、菌群失调性腹泻的主要病原体，其不仅在食品污染中占据着十分重要的位置，同时也是临床上非常重要的感染病原体之一，它与艾滋病、乙型肝炎并列为世界的三大感染顽疾。

现今，金黄色葡萄球菌的检测方法主要有传统的免疫学检测法、核酸检测法和分离鉴定法等，其中，分离鉴定法耗时耗力，而其它两种方法要求均微生物信号的转化、富集，近年来，利用量子点的荧光特性以及功能磁珠的快速分离富集的方法被广泛的应用，但是，该法的检测效率高低部分取决于磁珠的捕获效率，降低了检测信号的富集。而本发明中描述的使用无菌注射器和滤膜组合进行信号富集，由于是对所有菌体的拦截，这就保证了检测信号的有效富集，同时对于过滤而出的CdTe量子点和抗体的复合物可进行重复循环使用，增加了抗体的利用率，最大化减少损失，降低成本。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在提供一种快速富集与CdTe量子点荧光结合上的金黄色葡萄球菌的方法，并以量子点的荧光颜色为检测信号来检测金黄色葡萄球菌的存在。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

采用无菌注射器与0.45um滤膜的组合，是将微孔滤膜连接在注射器上，将菌体和抗体及量子点的混合物过膜，对量子点荧光信号进行富集。

本发明的富集方法对通过抗体用量子点标记金黄色葡萄球菌中的荧光信号有很强的富集功能。

本发明还公开了富集方法的检测操作步骤：

(1)以谷胱甘肽为稳定剂水相开放体系合成CdTe量子点；

(2)EDC活化CdTe量子点的羧基，与金黄色葡萄球菌特有基因IsdA的兔抗抗体25℃共培养1h，连接，超滤，设置空白对照；

(3)取1ml对数期的金黄色葡萄球菌，离心，PBS洗涤，加入步骤(2)得到的CdTe量子点和抗体的复合物，30-33℃共同培养1-4h，同时取1ml对数期的金黄色葡萄球菌，离心，PBS洗涤，不加入步骤(2)得到的CdTe量子点和抗体的复合物，30-33℃培养1-4h，作为空白对照；

(4)将共培养的混合物吸入1ml的无菌注射器中，用0.45um的滤膜过滤，回收过滤液，然后更换针头，分别用PBS、PBST洗涤三次，紫外下观察是否有荧光，若有荧光则说明有金黄色葡萄球菌，反之则无，空白对照组经洗涤均无荧光。将0.45μm滤膜放入无菌注射器组合应用。共培养的混合物就是指30-33℃下，量子点抗体复合物、金葡菌共同培养1-4h后的混合物

本发明利用量子点荧光作为信号，无菌注射器和滤膜组合进行信号分离放大，紫外光快速检测。该法可用于对微生物化学信号的进行富集，适用于各种微生物化学发光信号的富集，具有潜在的开发应用价值。

相对于现有技术，本发明创造所述的快速富集与金黄色葡萄球菌结合上的CdTe量子点荧光的方法及应用在金黄色葡萄球菌检测中具有以下优势：

本法采用量子点作为检测信号，并用无菌注射器和滤膜组合进行信号富集，借助紫外进行检测，此法快速，简便，准确。首先CdTe量子点具有非常稳定的光学特性，这就保证了最终检测信号的稳定性；其次，抗体的特异性以及专一性决定了实验的准确性，最后，仅用注射器和滤膜即可进行富集，快捷，简单。由于是对所有菌体的拦截，这就保证了检测信号的有效富集，同时对于过滤而出的CdTe量子点和抗体的复合物可进行重复循环使用，增加了抗体的利用率，最大化减少损失，降低成本。本法可衍生应用于其它微生物检测，相对于国标检测的方法，本法更为快速，简便，具有良好的应用前景。

附图说明

构成本发明创造的一部分的附图用来提供对本发明创造的进一步理解，本发明创造的示意性实施例及其说明用于解释本发明创造，并不构成对本发明创造的不当限定。在附图中：

图1CdTe量子点紫外荧光发光图。

图2为本发明创造实施例所述的无菌注射器与滤膜的实际操作组合。

图3为本发明创造实施例所述的金黄色葡萄球菌经膜富集后的量子点荧光的紫外发光图。

具体实施方式

为了使本发明上述特征和优点更加清楚和容易理解，下面将结合附图对本发明的实施方式作进一步详细描述。