[发明专利]一种用于非人灵长类神经细胞快速标记的西门利克森林病毒复制子及应用

说明书

本发明公开了一种用于非人灵长类神经细胞快速标记的西门利克森林病毒复制子及应用，所述西门利克森林病毒复制子为含有荧光蛋白基因和SEQ ID NO.4所示序列的pSFV‑replicon。利用该复制子可制备出携带绿色荧光蛋白基因且具有单次感染性的SFV病毒，该复制子或其制备的病毒颗粒在非人灵长类，特别是猴神经细胞的标记、细胞精细形态的描绘、神经环路标记、药物筛选平台的建立、药物抑制病毒作用机制、病毒疫苗和诊断试剂的研发、动物模型的建立、病毒复制和致病机制的分析等方面具有广泛的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体涉及一种用于非人灵长类神经细胞快速标记的西门利克森林病毒复制子及应用。

背景技术

人脑是自然界中最为复杂的系统之一,而神经网络是大脑行使功能的基础，神经网络的正常连接，使得机体产生正常的生理活动，如认知、学习、记忆和恐惧等；神经网络的异常往往导致神经疾病的出现，尚无有效手段来治疗这些神经疾病。目前，正常生理活动和致病机制均不清楚，主要的原因在于脑神经网络连接信息的缺乏。因此，开展脑神经环路的研究而绘制高精度的脑功能连接图谱，对于了解人的生理活动和致病机制具有重要的意义。

西门利克森林病毒(Semliki forest virus，SFV)属于披膜病毒科甲病毒属，其基因组为单股正链RNA，长度约为12kb。基因组编码的多聚蛋白可切割成4个结构蛋白(C、P62、6K和E1)和4个非结构蛋白(nsP1、nsP2、nsP3和nsP4)。塞姆利基森林病毒具有广泛的宿主范围，包括：人、鼠、猴等，能够感染神经系统，一方面不利于人类的健康和农业生产，另一方面，这种感染特性可以使得其成为介导外源基因到宿主体内的载体，另外，西门利克森林病毒感染脑神经系统的特性使其成为具备解析神经环路的能力。但是因为存在一系列工艺和技术改造方面的问题，所以目前其还没有应用到细胞精细形态的描绘、灵长类神经环路的标记等方面。而本发明通过一系列的条件优化、系统的改造和升级，获得了一种高效且稳定的具有单次感染特性的表达绿色荧光蛋白的SFV系统，明确了其在非人灵长类神经环路应用方面的效果，为开展脑科学研究提供了良好的工具系统。

随着分子生物学的不断发展，科学家已经能够通过反向遗传学的手段来定向改造病毒，为深入开展相关的病毒学研究提供了良好的工具。因此，本发明分别采用不同的技术途径获得了一种高效且稳定的具有单次感染特性的表达绿色荧光蛋白的SFV系统。将在神经细胞和非神经细胞精细形态的描绘、灵长类和非灵长类解析脑神经环路、病毒抗原表位分析和药物(如抗体药物)筛选、疫苗和诊断试剂的研发、动物模型的建立和病毒复制与致病机制的分析等方面具有广泛的应用价值和前景。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种用于非人灵长类神经细胞快速标记的西门利克森林病毒复制子，该复制子为含有荧光蛋白基因和SEQ ID NO.4所示序列的pSFV-replicon。该复制子可用于西门利克森林病毒类病毒颗粒的制备。

本发明还有一个目的在于提供了一种用于非人灵长类神经细胞快速标记的西门利克森林病毒复制子的应用，包括该复制子可用于制备西门利克森林病毒类病毒颗粒。制备出的病毒样颗粒可用于非人灵长类神经细胞快速标记，同时，该复制子还可用于蛋白表达、基因治疗、神经细胞精细形态的描绘、神经环路的解析、神经环路稀疏标记、病毒抗原表位分析和药物(如抗体药物)筛选、疫苗和诊断试剂的研发、动物模型的建立和病毒复制与致病机制的分析等方面具有广泛的应用价值。

为了实现以上目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于非人灵长类神经细胞快速标记的西门利克森林病毒复制子，该复制子为含有荧光蛋白基因和SEQ ID NO.4所示序列的pSFV-replicon。