[发明专利]一种灵芝多糖的超声波抽提方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种灵芝多糖的超声波抽提方法。

背景技术

灵芝多糖是由三股单糖链构成的、具有螺旋状立体构形(三级结构)的葡聚糖，其立体构形与脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似，是一种大分子化合物，其分子量从数千到数十万，它是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。不溶于高浓度的乙醇，微溶于低浓度的乙醇及冷水，在热水中能全部溶解。灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。灵芝多糖中除含有葡萄糖外，大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖，但含量较少。

传统的灵芝多糖提取方法主要是采用热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法提取。酸或碱浸提法虽能提高提取率，但对设备要求高且极易破坏多糖的结构，还存在环境污染问题。另外由于灵芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，活性多糖有效成分附着在细胞壁内侧，传统的热水浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。中国专利CN1181271介绍了使用低压水煮工艺，多糖的药理活性比常规水煮要高，但多糖提取率偏低，且所得提取物中灵芝三萜酸含量也偏低。中国专利CN1560072通过采用超临界CO₂萃取灵芝三萜酸提取液，提余物再经热水浸提得灵芝多糖提取液。但该方法所需设备投入较大、操作难度和生产成本也较高，且灵芝多糖提取率偏低。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供一种灵芝多糖的超声波抽提方法。本发明不仅最大限度地保留了灵芝多糖的活性，而且全部加工过程实现了连续和高效化。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种灵芝多糖的超声波抽提方法，包括以下步骤：

(1)原料前处理：将灵芝经拣选，去除霉烂、畸形的子实体，子实体经初破碎后过60-80目筛网，随后将初粉碎后的灵芝粉粒放入纳米粉碎机中再次粉碎，粉碎粒径为100～200nm；

(2)脱脂：在灵芝微粒中加入95％乙醇浸泡3天，滤去乙醇；

(3)粗提取：在乙醇处理过的灵芝微粒中加入复合酶，35～60℃下处理1～4h，酶解结束后加热灭活复合酶，随后加入15～20倍量的蒸馏水，95～100℃下回流提取1～2h，重复2次，合并提取液后离心取上清液；

(4)超声波醇沉：在步骤(3)得到的上清液加入3～5倍量的85～95％的乙醇，搅拌均匀，再置于超声振荡器中超声振荡0.5～1h，超声波频率35～40KHz，超声波功率为800～1000W，静置12～24h，离心过滤得滤饼，将所得滤饼依次用95％乙醇、无水乙醇、乙醚各洗涤一次，低温干燥后得到沉淀；

(5)除蛋白和脱色：将干燥后的沉淀溶于蒸馏水中，搅拌下加入鞣酸溶液，煮沸15min后过滤除去固体杂质，得到上清液，在鞣酸处理后得到的上清液中加入0.1％活性炭脱色两次，热过滤收集滤液；

(6)超滤和浓缩：将脱色后的滤液进行超滤，截留分子量30000，滤过液浓缩至相对密度为1.08～1.16，制成浓缩液；

(7)纯化：将浓缩液分别以0.025mol/L、0.1mol/L的硼砂，0.1mol/L的饱和氢氧化钠溶液进行洗脱，然后用0.2％的恿铜硫酸液比色测定吸收度，收集有多糖的洗脱液，浓缩脱盐后真空干燥即得灵芝多糖。

优选的，所述步骤(1)的复合酶溶液中复合酶为木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶中任意两种或三种混合物。

优选的，所述复合酶溶液用量为每克灵芝微粒中加入3mL。

优选的，所述步骤(4)所述超声波醇沉为：在步骤(3)得到的上清液加入4～5倍量的85～90％的乙醇，搅拌均匀，再置于超声振荡器中超声振荡0.5～1h，超声波频率35KHz，超声波功率为800～900W，静置12～24h，离心过滤得滤饼，将所得滤饼依次用95％乙醇、无水乙醇、乙醚各洗涤一次，低温干燥后得到沉淀。

优选的，所述步骤(3)所述粗提取为：在乙醇处理过的灵芝微粒中加入复合酶，45～50℃下处理2～3h，酶解结束后加热灭活复合酶，随后加入16～18倍量的蒸馏水，95～100℃下回流提取1～2h，重复2次，合并提取液后离心取上清液。

(三)有益效果

本发明提供了一种灵芝多糖的超声波抽提方法，与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明采用的纳米粉碎手段可以将存在于灵芝细胞内壁的多糖最大程度的释放出来；