[发明专利]抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体，其结合H9亚型禽流感病毒的HA蛋白，并具有血凝抑制活性。本发明还公开了检测H9亚型禽流感病毒抗体的试剂盒及上述单克隆抗体在制备诊断禽流感的产品中的应用。本发明检测H9亚型禽流感病毒抗体的试剂盒，具有良好的特异性和敏感性，适用于大规模不同宿主血清的抗体检测和筛查，在H9亚型禽流感病毒病的诊断及抗体检测方面具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及免疫化学技术领域，尤其涉及一种抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体、杂交瘤细胞株、以及应用该单克隆抗体检测H9亚型禽流感病毒特异性抗体的阻断ELISA试剂盒。

背景技术

禽流感(Avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的一种严重危害禽类健康的急性传染病。该病自1878年意大利鸡群首次爆发以来，世界各地都相继有各种亚型禽流感病毒引起AI爆发。其中H9亚型禽流感最早于1966年从美国威斯康辛州的一个火鸡养殖场中被分离到，自20世纪90年代开始其传播越来越广泛，并在亚洲、中东和北非许多国家形成地方流行，给养禽业带来沉重的打击，也造成无法估量的经济损失。在我国，H9N2亚型AIV从1992年开始在部分省区局部流行，1998年以来已在全国大部分地区形成地方流行。H9N2亚型AIV还可以直接感染人，同时还是H5N1/1997、H7N9/2013、H10N8/2013等可以感染并致死人的流感病毒的内部基因的供体。AI的潜伏期从几个小时到几天不等，潜伏期长短与病毒的致病性高低、感染强度、传播途径和感染禽种类有关。AI的临诊症状也因感染禽的种类、年龄、性别、并发感染情况有所感染毒株的毒力和其它环境因素等不同而表现很不一致，可涉及呼吸道、消化道、生殖道及神经系统。因此，对鸡群免疫后的效果进行监测对禽流感的防控将有积极的意义，同时也要加强对家禽养殖运输销售相关从业人员的禽流感感染监测工作。

目前，针对病毒检测的分子诊断方法已经建立，本研究室在2013年也建立了病毒检测的荧光定量PCR法(胡涛,滕巧泱,申伟霞,张月娥,李国新,李雪松,闫丽萍,姜秀云,李泽君,H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用.中国动物传染病学报,2013.21(2):p.7-13.)。ELISA诊断方法具备高敏感性和特异性、检测方便易行、自动化程度高，而且价格低廉等诸多优点，已成为一种常用的检测方法。针对H9亚型特异抗体的ELISA检测方法，有报道的是以杆状病毒表达的HA1分子蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法，该方法若用于不同宿主来源的血清抗体检测需要不同的二抗试剂才能进行，并且使得结果判定不能统一。阻断ELISA(blockinge ELISA,bELISA)以其特异性更高、不受宿主种类限制的优势在各种病毒疾病诊断和抗体检测领域得到应用。以A型流感病毒NP(nucleoprotein)单抗为基础建立的竞争ELISA方法可以检测不同宿主来源，包括鸭、鹅和野鸟中的流感病毒抗体。目前，还没有特异性检测H9亚型AIV特异性抗体的方法，为了更好地掌握H9亚型AIV在鸡群和人群中的抗体水平，建立一种可以大规模、准确、敏感、安全便捷的抗体检测方法很有必要。

发明内容

本发明要解决目前没有特异性针对H9亚型禽流感病毒的抗体检测方法的技术问题，提供一种抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体可用于特异、灵敏地检测H9亚型禽流感病毒。

此外，还需要提供一种应用上述单克隆抗体检测H9亚型禽流感病毒抗体的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种一种抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体，其结合H9亚型禽流感病毒的HA蛋白，并具有血凝抑制活性。

优选的，所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO.C2015211的杂交瘤细胞株产生。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞株。优选的，该杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC NO.C2015211。